[发明专利]使用芽孢杆菌系统产生肉毒神经毒素

权利要求书

1.产生肉毒神经毒素(BoNT)的方法，所述方法包括在适合于表达BoNT的条件下培养包含编码所述BoNT的核苷酸序列的芽孢杆菌(Bacillus)细胞。

2.权利要求1所述的方法，其中所述编码BoNT的核苷酸序列与启动子可操作地连接。

3.权利要求2所述的方法，其中所述启动子是诱导型启动子。

4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述编码BoNT的核苷酸序列在表达载体中。

5.权利要求4所述的方法，其中所述表达载体选自：pHT01、pHT08、pHT09、pHT10、pHT43、pHT253、pHT254、pHT 255、pNZ8901、pNZ8902、pNZ8910、pNZ8911、pWH1520、pMM1522、pMM1525、pHIS1522、pHIS1525、pSTREP1525、pSTREPHIS1525、pC-His1622、pC-Strep1622、pN-His-TEV1622、pN-Strep-TEV1622、pN-StrepXa1622、pSTOP1622、p3STOP1623hp、pC-HIS1623hp、pN-His-TEV1623hp、pSP-LipA-hp、pSP-YocH-hp、p3STOP1623-2RBShp、pC-STREP1623hp、pN-STREP-Xa1623hp、pN-STREP_TEV1623hp、pMGBm19、pPT7、pPT7-SPlipA、pPconst1326、pBP26、pBP27、pBQ200、pGP380、pGP382、pGP886、pGP888、pGP1459、pGP1460、pGP1389、pBE-S和pRB374。

6.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述BoNT在N或C端与融合结构域融合。

7.权利要求6所述的方法，其中所述融合结构域是亲和标签。

8.权利要求7所述的方法，其中所述亲和标签选自：His6、GST、Avi、Strep、S、MBP、Sumo、FLAG、HA、Myc、SBP、E、钙调蛋白、Softag1、Softag 3、TC、V5、VSV、Xpress、Halo和Fc。

9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述编码BoNT的核苷酸序列被密码子优化以在芽孢杆菌中表达。

10.权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述BoNT选自：BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/X、BoNT/En，及其变体。

11.权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述BoNT是非催化活性BoNT。

12.权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述BoNT是全长BoNT。

13.权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述BoNT是嵌合BoNT。

14.权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述BoNT包含与SEQ ID NO：1至139中任一个具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少99.5％同一性的氨基酸序列。

15.权利要求14所述的方法，其中所述BoNT包含SEQ ID NO：1至139中任一个的氨基酸序列。