[发明专利]库制备

权利要求书

1.一种制备测序库的方法，所述方法包含：

从样品获得多个DNA片段；

将衔接子接合到所述DNA片段上以形成衔接子接合片段；以及

在所述衔接子的存在下扩增所述衔接子接合片段以形成多个扩增子。

2.根据权利要求1所述的方法，其中接合所述衔接子包括将至少部分双链的寡核苷酸衔接子的第一链接合到所述DNA片段中的一个的5'端上。

3.根据权利要求2所述的方法，其中扩增所述衔接子接合片段包括添加与所述衔接子的所述第一链竞争的扩增引物。

4.根据权利要求2所述的方法，其进一步包含通过聚合酶延伸所述DNA片段的游离3'端以复制所述衔接子的所述第一链。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述衔接子的所述第一链比所述衔接子的第二链长至少几个核苷酸。

6.根据权利要求2所述的方法，其中扩增所述衔接子接合片段包括使用所述衔接子的所述第一链作为扩增引物。

7.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含纯化所述扩增子以去除过量材料。

8.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含将所述扩增子附接到流动池表面以形成测序簇。

9.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含将来自所述样品的核酸片段化以获得所述多个DNA片段。

10.根据权利要求1所述的方法，其中扩增步骤在包括辅因子、酶和聚乙二醇中的一种或多种的过量接合试剂的存在下进行。

11.一种制备测序库的方法，所述方法包含：

从来自样品的核酸获得多个DNA片段；

将所述DNA片段与衔接子寡核苷酸一起培育以形成寡核苷酸延伸产物，其中至少第一衔接子寡核苷酸接合到片段上，并且至少第二衔接子寡核苷酸与所述片段杂交并且通过聚合酶延伸，从而形成与靶标互补并且与所述第一衔接子寡核苷酸互补的序列；以及

在所述衔接子寡核苷酸的存在下扩增所述寡核苷酸延伸产物以形成多个扩增子。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第二衔接子寡核苷酸的拷贝在扩增步骤期间充当引物。

13.根据权利要求11所述的方法，其进一步包含纯化所述扩增子以去除过量材料。

14.根据权利要求11所述的方法，其进一步包含将所述扩增子附接到流动池表面以形成测序簇。

15.根据权利要求14所述的方法，其进一步包含对所述扩增子进行测序以测定所述核酸的序列。

16.根据权利要求11所述的方法，其进一步包含将来自所述样品的核酸片段化以获得所述多个DNA片段。

17.根据权利要求11所述的方法，其中扩增步骤在包括辅因子、酶和聚乙二醇中的一种或多种的过量接合试剂的存在下进行。