[发明专利]CAR-T细胞的封闭系统制造过程在审
| 申请号： | 201980016239.9 | 申请日： | 2019-02-04 |
| 公开（公告）号： | CN111801104A | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 迈克尔·C·延森;约书亚·古斯塔夫松 | 申请（专利权）人： | 西雅图儿童医院(DBA西雅图儿童研究所) |
| 主分类号： | A61K35/17 | 分类号： | A61K35/17;C12N5/16;G01N33/543 |
| 代理公司： | 北京信慧永光知识产权代理有限责任公司 11290 | 代理人： | 董世豪;杨国强 |
| 地址： | 美国华*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | car 细胞 封闭系统 制造 过程 | ||
1.一种制造基因修饰T细胞的方法，其中，所述基因修饰T细胞包含嵌合抗原受体，所述方法包括：
在单个培养容器中的第一培养基中提供CD8+T细胞和CD4+T细胞；
将第二培养基放入所述单个培养容器中，从而产生共培养的CD4+T细胞和CD8+T细胞，对所述细胞进行起始处理以用于转导；
收获经起始处理的CD4+T细胞和CD8+T细胞；以及
用载体转导所述经起始处理的CD4+T细胞和CD8+T细胞，从而产生基因修饰T细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述方法在生物安全柜(BSC)中进行。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述方法在生物安全柜(BSC)的外部进行。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述载体为病毒载体。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述载体为慢病毒载体、腺相关载体或腺病毒载体。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，通过如下进行所述转导：例如在CTSDynabeads CD3/CD28上磁性地富集所述经起始处理的CD4+T细胞和CD8+T细胞，以及将转导混合物与所述经起始处理的CD4+T细胞和CD8+T细胞一起孵育确定的时间段。
7.如权利要求6所述的方法，其中，在将转导介质添加至所述细胞之前，从所述培养容器中移去所述培养基。
8.如权利要求6或7所述的方法，其中，所述确定的时间段处于约1小时至约24小时、约2小时至约12小时或约2小时至约5小时的范围内。
9.如权利要求6-8中任一项所述的方法，其中，在所述确定的时间段结束时，将移去的所述培养基重新引入所述容器中。
10.如权利要求6-9中任一项所述的方法，其中，所述转导混合物包含所述载体。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述第一培养基为无细胞因子的培养基或者缺少胎牛血清或小牛血清、或其任意组合。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述第二培养基包含至少一种细胞因子。
13.如权利要求12所述的方法，其中，所述至少一种细胞因子为IL-2、IL-7、IL-15或IL-21。
14.如权利要求13所述的方法，其中，所述至少一种细胞因子为IL-21、IL-15和IL-7。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，所述转导步骤在所述经起始处理的CD4+T细胞和CD8+T细胞的收获步骤之后24小时进行。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中，所述第一培养基和/或第二培养基还包含蛋白补充剂。
17.如权利要求6-16中任一项所述的方法，其中，所述转导混合物进一步包含硫酸鱼精蛋白或聚凝胺或两者。
18.如权利要求6-17中任一项所述的方法，其中，所述转导混合物进一步包含白介素。
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