[发明专利]用于组织和细胞的多重分析的顺序染色

权利要求书

1.一种组合物，所述组合物包括：

复数个分析物检测剂，每个分析物检测剂包含可操作地连接至所述分析物检测剂的不稳定标签，每个不稳定标签包括与另一个不稳定标签不同的信号，每个分析物检测剂靶向不同分析物；

每个不稳定标签是可移除的或可淬灭的，而不会破坏施加了所述复数个分析物检测剂的样品，并允许使用第二复数个分析物检测剂对所述样品进行进一步分析。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中至少一个不稳定标签包含荧光团。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述复数个分析物检测剂中的至少一个包括寡核苷酸。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述寡核苷酸是单链的或双链的。

5.根据权利要求3所述的组合物，其中所述寡核苷酸包含荧光标记。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中至少一个不稳定标签是通过核酸内切酶、核酸外切酶、DNA酶、RNA酶、聚合酶、TCEP、β-巯基乙醇、高碘酸盐、pH变化、肽酶，或蛋白酶可去除的。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中至少一个不稳定标签是可淬灭的。

8.根据权利要求1的组合物，其中至少一个所述分析物检测剂还包含接头。

9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述复数个分析物检测剂的至少一个包括交联剂。

10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述交联剂包括基于金属的交联剂、抗生物素蛋白、链霉亲和素，或二硫化物。

11.一种用于分析样品的方法，所述方法包括：

(a)用复数个分析物检测剂标记样品，每个分析物检测剂包括可操作地连接所述分析物检测剂的不稳定标签，每个不稳定标签包括与另一个不稳定标签不同的信号，每个分析物检测剂靶向不同分析物；

(b)检测由所述样品上的所述复数个分析物检测剂中的每一个所产生的信号；

(c)从每种分析物检测剂中去除所述信号；以及

(d)重复步骤a-c。

12.根据权利要求11所述的方法，还包括重复步骤a-c至少另外一次。

13.根据权利要求11所述的方法，还包括将所述样品放置在平面上。

14.根据权利要求11所述的方法，还包括将所述样品放置在允许流体交换的腔室中。

15.根据权利要求11所述的方法，包括通过成像检测所述信号。

16.根据权利要求11所述的方法，包括通过用靶向所述标签上的不稳定连接的裂解剂处理所述样品来去除信号。

17.根据权利要求11所述的方法，包括通过淬灭移除所述信号。

18.根据权利要求13所述的方法，还包括将交联剂添加到所述平面。

19.根据权利要求11所述的方法，进一步包括在移除所述信号之后阻断所述样品。

20.根据权利要求11所述的方法，包括检测来自15种不同分析物的至少15种不同的信号。

21.根据权利要求11所述的方法，包括加入EDTA以灭活添加到所述样品中的酶。

22.根据权利要求11所述的方法，其中至少一个分析物检测剂包括分支DNA。