[发明专利]三特异性抗原结合蛋白

说明书

提供了包含以下的三特异性抗原结合蛋白：能够结合肿瘤细胞的细胞表面蛋白的第一结合结构域；能够结合该肿瘤细胞的细胞表面免疫检查点蛋白的第二结合结构域；以及能够结合免疫细胞的细胞表面蛋白的第三结合结构域。提供了制备三特异性抗原结合蛋白的方法。

技术领域

本披露涉及制备三特异性抗原结合蛋白的组合物和方法。

背景技术

双特异性T细胞衔接器通过CD3激活T细胞，并使它们与肿瘤表达的抗原交联，从而诱导免疫突触形成和肿瘤细胞裂解。双特异性T细胞衔接器已在患有液体肿瘤的患者中显示出治疗功效；但是，它们并不能使所有患者受益。抗肿瘤免疫受到PD-1/PD-L1途径介导的免疫抑制的限制，并且无法从现有的双特异性T细胞衔接器中获益的患者可能不会产生反应，因为其T细胞通过PD-1/PD-L1途径被无能化(anergized)。阻断免疫检查点分子(如PD-L1)的单克隆抗体的使用可能有助于增加使免疫系统转向对抗肿瘤的基线T细胞特异性免疫反应。但是，免疫检查点分子功能的破坏会导致患者的免疫耐受性(引起不受抑制的免疫反应)和免疫毒性的失衡。

肿瘤相关抗原(TAA)和癌细胞表面免疫检查点的双重靶向被认为可增强治疗功效、限制主要逃逸机制并增加肿瘤靶向选择性，从而导致全身毒性降低和治疗指数提高。然而，这些策略典型地依赖于对免疫检查点的降低的亲和力和对肿瘤相关抗原的高亲和力。这些策略无法解决与TAA在正常组织上的表达或细胞表面抗原脱落有关的问题，这些问题可能会形成“抗原沉默(antigensink)”，从而阻止治疗性抗体在体内到达预期的肿瘤细胞靶标(参见，例如Piccione等人mAbs[单克隆抗体]，7(5)：946-956，2015；Herrmann等人Blood[血液]，132(23)：2484-2494，2018)。

需要能够更加高效地将免疫细胞募集到肿瘤、、同时选择性地抑制肿瘤上的免疫检查点分子同时最大程度地减少患者的免疫耐受性和免疫毒性的失衡的多特异性抗体。

发明内容

本发明提供对肿瘤抗原和免疫细胞募集抗原具有特异性的三特异性抗原结合蛋白。

本发明涉及结合T细胞和通过CD3激活T细胞，结合肿瘤特异性抗原，并抑制免疫检查点途径的三特异性T细胞衔接器。为了防止免疫系统不加选择地攻击细胞，这些三特异性抗原结合蛋白以低亲和力结合免疫检查点，从而允许与细胞表面免疫检查点蛋白(像PD-L1)快速解离。与肿瘤相关抗原和免疫检查点蛋白PD-L1同时结合赋予亲合力，导致与肿瘤细胞上存在的抗原结合。这允许更好地区分具有和不具有主要存在于肿瘤细胞中的抗原的细胞。

此外，本发明评价了亲和力和亲合力在三特异性抗原结合蛋白促进生理条件下选择性肿瘤靶向的能力中的组合作用，该三特异性抗原结合蛋白由低亲和力的抗肿瘤相关抗原部分组成，与一系列亲和力调节的PD-L1变体配对。

此外，本发明描述了使本发明的三特异性抗原结合蛋白能够高效地产生和发展的多功能重组抗原结合蛋白形式。这些多功能抗原结合蛋白形式利用Fab片段的重链(Fd片段)和轻链(L)的高效异源二聚化特性形成支架，在该支架上通过另外的结合剂引入另外的功能，其中这些结合剂包括但不限于scFv和单结构域抗原结合蛋白。

在本发明的一个方面，提供了三特异性抗原结合蛋白，该三特异性抗原结合蛋白包含：a)能够结合肿瘤细胞的细胞表面蛋白的第一结合结构域；b)能够结合该肿瘤细胞的细胞表面免疫检查点蛋白的第二结合结构域；以及c)能够与免疫细胞的细胞表面蛋白结合的第三结合结构域，其中该第一结合结构域以降低的亲和力与肿瘤细胞的细胞表面蛋白结合，从而抑制与非肿瘤细胞或可溶形式的细胞表面蛋白的结合。