[发明专利]提升SUPT4H在细胞中核苷酸重复序列扩张基因的转录调控能力的方法

说明书

本发明提供一种提升SUPT4H在细胞中核苷酸重复序列扩张基因的转录调控能力的方法，即体外调控细胞中含有核苷酸重复序列扩张基因的方法，包含:抑制SPT4或SUPT4H的生物活性；及调控R‑loops的形成。抑制步骤能有效减少含有核苷酸重复序列扩张基因的表达及调控步骤能更加强抑制步骤的效果。抑制步骤和调控步骤系透过核苷酸重复序列所产生的R‑loops干扰了RNA polymeraseⅡ转录DNA模版的能力，进而达到调控基因表达的目的。

技术领域

非临时申请案要求优先权是根据美国专利法条35U.S.C.§119(a)，根据专利No(s).(62/620,308)在2018年1月22日于美国提交，上述所列的专利参考文献全体皆引用作为本说明书的揭示内容。

背景技术

核苷酸重复序列扩张疾病包括由简单串联重复(通常是三核苷酸重复序列)的不稳定性和扩张所引起的遗传性疾病组，致病性核苷酸重复序列扩张可发生在基因的编码或非编码序列中，例如弗里德赖希共济失调(Friedreich'sAtaxia)之类的疾病中，非编码序列的扩张引起基因转录静默或下调，造成基因丧失功能，因此为隐性遗传。相反的，在亨丁顿氏舞蹈症(Huntington disease)的病症中，CAG三核苷酸扩张发生在基因的编码序列中，因此产生的蛋白质含有异常长度的麸酰胺酸(glutamine，谷氨酰胺)片段，导致蛋白质的功能变异并且对细胞产生毒害，这为显性遗传。

三核苷酸重复序列扩张疾病(Trinucleotide Repeat Disorders)(也称为三核苷酸重复扩张疾病、三联体重复扩张疾病或密码子重复疾病)是由三核苷酸重复序列异常扩张引起的一组遗传性疾病。三核苷酸重复扩张可发生在基因的编码序列中或内含子中，当核苷酸重复次数超过正常、稳定的阈值就会造成疾病的产生，并且每个基因产生病变所需的重复次数稍有不同；如果三核苷酸重复扩张存在于基因的编码序列中，则该突变可能导致缺陷基因，如果三核苷酸重复扩张存在于内含子中，则可能在细胞核中形成RNA焦点，引起毒性作用。在超过一半这个类型的疾病中，重复密码子是CAG，如果该核苷酸重复扩张存在于编码区中，这些疾病通常被称为多麸酰胺酸(或PolyQ)疾病，其余的被归类为非多麸酰胺酸疾病。

表1.非多麸酰胺酸疾病

肌强直萎缩症(DM，muotonic dystrophy)是最常见的成人肌肉萎缩症，其特征为渐进式的肌功能退化、肌强直和多重器官功能受损，迄今为止，已经鉴定了经由相似基因突变机制所引起的两种不同疾病；第1型肌强直萎缩症(DM1，Steinert病)是由DMPK中的CTG核苷酸序列扩张所引起的，而第2型肌强直萎缩症(DM2)是由CNBP中的CCTG核苷酸序列扩张所引起。此第2型肌强直萎缩症(DM2)是由第三条染色体上CNBP基因突变引起，特征为CNBP基因中胞嘧啶-胞嘧啶-胸腺嘧啶-鸟苷(CCTG)四核苷酸的序列扩张，由于它涉及四个核苷酸的重复序列，所以它不是三核苷酸重复序列疾病，而是四核苷酸重复序列疾病，DM2的核苷酸重复扩张比DM1大得多，范围从75次重复到超过11,000次重复。

此外，最近发现C9ORF72基因突变是遗传性ALS和额颞叶痴呆最常见的原因。C9ORF72基因突变在ALS的致病机制导因于六核苷酸重复序列GGGGCC位于C9ORF72内含子中的异常扩张，从未受影响的个体中的少数重复次数到受影响个体中的数百甚至数千个重复次数。