[发明专利]评估病毒载体效力的方法

权利要求书

1.权利要求内容为：

一种转导用于免疫治疗之T细胞的方法，包括

(a)从至少一个个体中获得T细胞，

(b)用抗CD3抗体和抗CD28抗体激活T细胞，

用多个体积浓度的病毒载体转导活化的T细胞，

(c)扩增转导的T细胞，

(d)测量在多个体积浓度下表达转基因的扩增T细胞的数量和/或每个扩增T细胞中整合转基因的拷贝数，

(e)确定体积浓度，其产生最大平均数量的表达转基因的扩增T细胞和/或在来自至少一个个体的每个扩增T细胞中不超过五个拷贝的整合转基因之最大平均拷贝数的整合转基因，以及

(f)以确定的体积浓度用病毒载体转导来自至少一个个体的T细胞以用于免疫治疗。

2.权利要求1所述的方法，其中病毒载体是表达T细胞受体(TCR)的逆转录病毒载体。

3.权利要求1或2所述的方法，其中病毒载体是表达TCR的慢病毒载体。

4.权利要求1-3任一项中所述的方法，其中多个体积浓度选自由每0.5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、每1.0ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、每2.5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml、和每5ml转导混合物含约0.01μl至约1ml组成的群。

5.权利要求4所述的方法，其中转导混合物包含细胞浓度为约0.1x10⁶个细胞/ml至约1.0x10⁶个细胞/ml、约0.5x10⁶个细胞/ml至约1.0x10⁶个细胞/ml、约1.0x10⁶个细胞/ml至约1.0x10⁷个细胞/ml、约5.0x10⁶个细胞/ml至约1.0x10⁷个细胞/ml、约1.0x10⁷个细胞/ml至约1.0x10⁸个细胞/ml或约5.0x10⁷个细胞/ml至约1.0x10⁸个细胞/ml。

6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述T细胞获自多个健康个体。

7.权利要求1-6中任一项所述的方法，包括扩增转导的T细胞。

8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中确定在来自至少一个个体的扩增T细胞中产生最大平均数量的表达转基因的转导T细胞的体积浓度。

9.权利要求1-8中任一项所述的方法，其中确定在来自至少一个个体的扩增T细胞中产生最大平均拷贝数的整合转基因的体积浓度。

10.权利要求1-9中任一项所述的方法，其中确定的体积浓度为选自由每0.5ml转导混合物含约1μl至约50μl、每0.5ml转导混合物含约5μl至约15μl、和每0.5ml转导混合物含约8μl至约12μl组成的组。

11.权利要求1-10中任一项所述的方法，其中待治疗的个体是癌症患者。

12.权利要求11所述的方法，其中所述癌症选自由肝细胞癌(HCC)、结直肠癌(CRC)、胶质母细胞瘤(GB)、胃癌(GC)、食道癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌(PC)、肾细胞癌(RCC)、良性前列腺增生(BPH)、前列腺癌(PCA)、卵巢癌(OC)、黑色素瘤、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、梅克尔细胞癌(MCC)、小细胞肺癌(SCLC)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性骨髓性白血病(AML)、胆囊癌和胆管癌(GBC、CCC)、膀胱癌(UBC)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)和子宫癌(UEC)组成的组。

13.权利要求1-12中任一项所述的方法，其中从所述至少一个供体、患者或个体获得的T细胞是CD8+T细胞。