[发明专利]一种HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法

说明书

本发明公开了一种HPLC‑MS‑MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，包括以下步骤：分别向校正标示样品、质控样品、内标样品以及待测人血浆中加入50.0ng/mL卡马西平‑d8内标工作液，再分别用乙腈稀释4倍，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用20％乙腈水溶液稀释4倍即可进样分析。分别向空白基质和水样中加入50％乙腈水溶液，再分别用乙腈稀释4倍，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用20％乙腈水溶液稀释4倍即可进样分析。将上述处理后的各个样品分别注入液相色谱质谱联用仪中，对卡马西平以及卡马西平‑d8成分进行定量检测。本发明对样品分析简单便捷，检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。

技术领域

本发明涉及了生物医药技术领域，具体的是一种HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法。

背景技术

生物样品分析随着质谱技术的发展，其应用日益广泛。但由于生物样品中的基质复杂，且药物浓度低。因此，需要获得更准确且稳定的测定方法。HPLC-MS-MS技术中，高效液相色谱是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在两相间的分配系数、亲和力、吸附能力、离子交换或分子大小不同引起的排阻作用差别使不同溶质进行分离。采用HPLC-MS-MS技术，建立并验证人血浆中卡马西平浓度测定的液质联用方法，可以获得更加准确且稳定性高的含量测定方法，从而便于科研以及工业化应用。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明实施例提供了提供了一种HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，其对样品分析简单便捷，检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。

本发明公开了一种HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，包括以下步骤：

步骤一、样品制备：

制备校正标示样品：以卡马西平为溶质，以50％乙腈水溶液为溶剂，配制卡马西平梯度浓度为20～20000ng/mL的校正标示工作液；分别取各浓度校正标示工作液，用空白基质稀释20倍，得到校正标示样品；

制备质控样品：以卡马西平为溶质，以50％乙腈水溶液为溶剂，配制卡马西平梯度浓度为20～16000ng/mL的质控工作液；分别取各浓度质控工作液，用空白基质稀释20倍，得到质控样品；

制备内标样品：以卡马西平-d8为溶质，以甲醇二甲基亚砜溶液为溶剂，得到卡马西平-d8储备液；将储备液用50％乙腈水溶液稀释得到卡马西平-d8浓度为50.0ng/mL、10000ng/mL的内标工作液；分别取各浓度内标工作液，用空白基质稀释20倍，得到内标样品；

步骤二、样品处理：

分别向校正标示样品、质控样品、内标样品以及待测人血浆中加入50.0ng/mL卡马西平-d8内标工作液，再分别用乙腈稀释4倍，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用20％乙腈水溶液稀释4倍；

分别向空白基质和水样中加入50％乙腈水溶液，再分别用乙腈稀释4倍，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用20％乙腈水溶液稀释4倍；

步骤三、样品检测：

将上述步骤二中处理后的校正标示样品、质控样品、内标样品、待测人血浆、空白基质和水样分别注入液相色谱质谱联用仪中，对卡马西平以及卡马西平-d8成分进行定量检测。

作为优选，所述步骤一中，甲醇二甲基亚砜溶液中，甲醇和二甲基亚砜的体积比为1:1。

作为优选，所述检测步骤中，按照下述液相色谱条件进行检测：

固定相：填料粒径为5μm，直径2mm，长度50mm的Gemini C18色谱柱；

流动相：流动相为为A和B的混合体系，A为甲酸水溶液，其中甲酸与水的体积比为0.1:100；B为甲酸乙腈溶液，其中甲酸与乙腈的体积比为0.1:100；