[发明专利]一种HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法

权利要求书

1.一种HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、样品制备：

制备校正标示样品：以卡马西平为溶质，以50%乙腈水溶液为溶剂，配制卡马西平梯度浓度为20～20000ng/mL的校正标示工作液；分别取各浓度校正标示工作液，用空白基质稀释20倍，得到校正标示样品；

制备质控样品：以卡马西平为溶质，以50%乙腈水溶液为溶剂，配制卡马西平梯度浓度为20～16000ng/mL的质控工作液；分别取各浓度质控工作液，用空白基质稀释20倍，得到质控样品；

制备内标样品：以卡马西平-d8为溶质，以甲醇二甲基亚砜溶液为溶剂，得到卡马西平-d8储备液；将储备液用50%乙腈水溶液稀释得到卡马西平-d8浓度为50.0ng/mL、10000ng/mL的内标工作液；分别取各浓度内标工作液，用空白基质稀释20倍，得到内标样品；

步骤二、样品处理：

分别向校正标示样品、质控样品、内标样品以及待测人血浆中加入50.0ng/mL卡马西平-d8内标工作液，再分别用乙腈稀释4倍，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用20%乙腈水溶液稀释4倍；

分别向空白基质和水样中加入50%乙腈水溶液，再分别用乙腈稀释4倍，分别离心取上清液，然后再分别将上清液用20%乙腈水溶液稀释4倍；

步骤三、样品检测：

将上述步骤二中处理后的校正标示样品、质控样品、内标样品、待测人血浆、空白基质和水样分别注入液相色谱质谱联用仪中，对卡马西平以及卡马西平-d8成分进行定量检测；

其中，按照下述液相色谱条件进行检测：

固定相：填料粒径为5µm，直径2 mm，长度50 mm的Gemini C18 色谱柱；

流动相：流动相为A和B的混合体系，A为甲酸水溶液，其中甲酸与水的体积比为0.1:100；B为甲酸乙腈溶液，其中甲酸与乙腈的体积比为0.1:100；

洗脱梯度为：

0.01min， A的体积百分比为68%，B的体积百分比为32%；

1.3min，A的体积百分比为0%，B的体积百分比为100%；

2min，A的体积百分比为0%，B的体积百分比为100%；

2.01min，A的体积百分比为68%，B的体积百分比为32%；

3min， A的体积百分比为68%，B的体积百分比为32%。

2.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，其特征在于，所述步骤一中甲醇二甲基亚砜溶液中，甲醇和二甲基亚砜的体积比为1:1。

3.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，其特征在于，检测步骤中，所述液相色谱进样器清洗液为：强洗采用30%乙腈水溶液，弱洗采用甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、水、氨水按照体积比30:30:10:10:20:1混合而成。

4.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，其特征在于，检测步骤中，按照下述液相色谱条件进行检测：

流速：0.2～0.6mL/min。

5.根据权利要求4所述的HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，其特征在于，检测步骤中，按照下述液相色谱条件进行检测：

流速：0.4mL/min；

柱温：40℃；

自动进样器温度：8℃；

进样量：5μL。

6.根据权利要求1所述的HPLC-MS-MS法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法，其特征在于，检测步骤中，按照下述质谱条件进行检测：

离子源：电喷雾离子源；

离子化模式：正离子模式；

分辨力模式为Unit；

碰撞气、气帘气、雾化气、辅助气1和辅助气2均为高纯氮气；

喷雾电压5000V。