[发明专利]质谱检测乳制品中A1、A2型β酪蛋白的质谱模型及其构建方法

说明书

本发明公开一种检测乳品中A1、A2型β酪蛋白的质谱模型，该质谱模型包括A1β‑酪蛋白、A2β酪蛋白的标准特征多肽组，其中所述乳制品包括牛乳、羊乳，所述A1β‑酪蛋白、A2β酪蛋白的标准特征多肽序列分别如SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2所示。本发明还公开了该质谱模型的构建方法。利用本发明的方法能够准确地检测出乳品中是否含有A1β‑酪蛋白和A2β‑酪蛋白，并能对其二者含量进行相对定量。

技术领域

本发明属于生物光电检测技术领域，具体涉及质谱检测乳制品中A1、A2型β酪蛋白的质谱模型及其构建方法。

技术背景

酪蛋白是乳品中含量最高的蛋白质，占牛乳蛋白含量的80％左右。根据氨基酸组成和电泳行为的不同，酪蛋白可分为αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白，其中β-酪蛋白约占牛乳酪蛋白总量的30-35％。β-酪蛋白又存在多种变体，最常见的是A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白，两者的区别在于氨基酸链的第67位存在变异，前者为组氨酸，后者为脯氨酸。既含有A1β-酪蛋白又含有A2β-酪蛋白的乳品为A1/A2型奶，只含有A2β-酪蛋白的乳品为A2型奶，只含有A1β-酪蛋白的乳品为A1型奶。

现已发现，BCM-7能穿过胃肠壁进入血液循环，并通过阿片受体影响全身和细胞活动。此外，BCM-7和其他β-酪蛋白衍生物为阿片受体的强效外源性激动剂—外啡肽，其中与μ受体的亲合力最大。因此，BCM-7可能影响多个器官/系统的活动，尤其消化系统和免疫细胞。此外，BCM-7也可能与婴幼儿的各种疾病有关，如Ⅰ型糖尿病和呼吸功能障碍，消化功能疾病，促使产生肛瘘，免疫功能疾病，并影响中枢神经系统活动。因此含有A2β-酪蛋白的乳制品更加健康安全，在国内外市场上也更受欢迎。

另外，乳业是一个国家发达程度和食品消费现代化水平的重要标志，其发展对优化农业结构，促进畜牧业产业升级，增加农民收入，提高国民身体素质，都具有重要意义。当前我国的乳业正处于从传统乳业向现代乳业转型的关键时期，未来乳业的发展将从注重数量型向质量型升级。由于并不是所有的奶牛都能产出只含纯净A2型β-酪蛋白而不含A1型β-酪蛋白的牛奶，因此A2型β-酪蛋白的奶源非常稀有。现今，西方的奶牛中只有约30％的奶牛为纯正的A2奶牛，由其所产的牛奶只含100％纯净A2型β-酪蛋白。如果我国能掌握A2β-酪蛋白的奶制品的鉴定技术，根据我国庞大的奶牛牲畜资源，从中筛选出纯产A2型奶的奶牛，从而发展中国特色的A2奶制品加工产业，对于提升中国的乳业行业发展水平具有不可估量的作用。

中国发明专利申请号201610784180.6、发明名称为“检测牛乳中A1β-酪蛋白及A2β-酪蛋白的方法”。该方法包括：(1)将待测样品依次进行加热、离心、冷冻及解冻，以便得到待测储备液；(2)将所述待测储备液进行预处理，以便得到待测液，其中，所述预处理包括将所述待测储备液与预处理液进行混合；以及(3)利用毛细管电泳法对所述待测液进行检测，以便确定牛乳中是否含有A1β-酪蛋白及A2β-酪蛋白。然而，该方法所用的毛细管电泳法存在检测时间长、检测样本数量低、检测成本高、检测结果灵敏度不高等缺点，不能适应现代化奶业的发展需要。

中国发明专利申请号201810487863.7、发明名称为“一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的特征肽及方法”公开了一种检测牛乳品中A2β酪蛋白含量的方法。该方法包括：(1)将待测样品用水稀释，依次进行变性处理、胰蛋白酶酶解处理、二甲基化处理后，得到二甲基化的内标肽溶液；(2)将特征内标肽经相同处理，得到二甲基化的内标肽溶液；(3)将内标肽溶液与样品溶液混合，采用高效液相色谱-质谱联用技术对所述待测样品进行检测；(4)，计算待测样品中A2β-酪蛋白特征肽与其相对应的内标肽的峰面积比，得到样品中A2β-酪蛋白的含量。然而，该方法所用的液相质谱法需要针对A2β酪蛋白的特定氨基酸片段设计处理过程，同时需要引入特定序列的内标肽，因此存在检测时间长、检测样本数量低、检测成本高等缺点，不能适应现代化奶业的发展需要。