[发明专利]一种粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法

说明书

本发明提供一种粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法，涉及生物技术领域，包括如下步骤：采集感染有幽门螺杆菌的患者的新鲜粪便样本作为原材料放入第一离心管中；羟基磁珠提取粪便中的幽门螺杆菌DNA；羧基磁珠提取处理液中的幽门螺杆菌DNA。本发明提取效率高，纯度好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylroi，简称H.pylori或HP)是一种螺旋形、微厌氧、的细菌，可寄生在人的胃部，并可随粪便少量的排出体外。全世界有超过半数的人感染HP，目前对幽门螺杆菌的诊断主要采用C13吹气实验，但其存在着约10％的误诊率，因此不能作为检测幽门螺杆菌的金标准，并且C13具有一定的放射性，可能对人体有一定的伤害。粪便中检幽门螺杆菌可作为一个待发展的检测方向，但粪便中的杂质非常多，使用常规方法提取到的DNA中含有很多的抑制物，对后续的PCR实验产生抑制，因此PCR实验很难检测到含量较低的幽门螺杆菌DNA。

因此急需提供一种提取效率高，纯度好的粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法的不足，提供一种粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法。

本发明提供了如下的技术方案：

一种粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法，包括如下步骤：

S1.采集感染有幽门螺杆菌的患者的新鲜粪便样本作为原材料放入第一离心管中；

S2.羟基磁珠提取粪便中的幽门螺杆菌DNA：粪便样本中加入生理盐水和异硫氰酸胍裂解液，粪便样品涡旋振荡至均质化后置于恒温混匀仪中，混匀后在12000rpm的条件下离心5min使粪便颗粒沉淀，取上清液至第二离心管中，加入蛋白酶K和5％SDS溶液，涡旋振荡后置于恒温混匀仪中，混匀后加入异丙醇和表面经硅羟基包被的磁珠，涡旋振荡后置于恒温混匀仪中，混匀后将第二离心管置于磁力架上，静置至磁珠全部吸附，弃去溶液后向第二离心管中加入洗涤液a，静置至磁珠全部吸附，弃去溶液后向第二离心管中加入洗涤液b，吹匀后置于磁力架上，静置至磁珠全部吸附，弃去溶液后静置第二离心管至液体全部挥发，向第二离心管中加入ddH2O，吹匀后置于恒温混匀仪中，瞬离第二离心管后置于磁力架上，静置至磁珠全部吸附，吸取第二离心管中的处理液至第三离心管中；

S3.羧基磁珠提取处理液中的幽门螺杆菌DNA：向第三离心管中加入羧基磁珠，涡旋振荡后于室温下静置5min，将第三离心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附，避免接触磁珠的情况下弃去第三离心管中的溶液，向第三离心管中加入80％乙醇，待悬起的磁珠完全吸附后弃去第三离心管中的溶液，静置10min至乙醇完全挥发后加入ddH20，涡旋振荡使磁珠完全重悬于ddH20中后，室温下静置5min，将第三离心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附，将洗脱液转移至第四离心管中，即得到纯净的DNA。

优选的，步骤S2中异硫氰酸胍裂解液的浓度为5mol/L。

优选的，步骤S2中洗涤液a包括3M盐酸胍、10mMTris和50％乙醇，洗涤液a的pH至为8.0。

优选的，步骤S2中洗涤液b包括10mMTris和80％乙醇。

本发明的有益效果是：由于羟基磁珠和羧基磁珠均可吸附DNA，对粪便中的杂志类物质(比如多糖和色素)的吸附情况不同，组合使用羟基磁珠和羧基磁珠对粪便提取DNA可有效去除粪便中大量不易去除的杂质，可提取到高纯度的DNA。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：