[发明专利]一种石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液、试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种石蜡切片样本DNA提取脱蜡裂解结合液、试剂盒及方法，所述脱蜡裂解结合液包含以下浓度的组分：液态脱蜡试剂25～45v/v％、无水乙醇5～10v/v％、Tris‑HCl 10～500mM、盐酸胍1～7M、尿素2～5M、NaCl 0.1～1M、SDS 0.1～5w/v％、曲拉通X‑100 0.1～1v/v％、亚精胺0.1～1w/v％，余量为水。上述脱蜡裂解结合液可将样本脱蜡、组织裂解和DNA结合在一步中完成，简化了操作步骤，有效节省了操作时间和人力成本，适用范围广。

技术领域

本发明属于核酸提取技术领域，具体涉及一种石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液、试剂盒及方法。

背景技术

石蜡切片样本DNA提取过程中，因组织已经完全脱去水，包埋于石蜡固体中，组织中的核酸与蛋白质、石蜡紧紧的交联在一起，使得从石蜡切片样本中提取核酸DNA非常困难。一般而言，从石蜡切片样本中提取核酸，需经过组织样本脱蜡复水、蛋白酶K消化组织、裂解液将DNA与蛋白质等物质解交联、DNA提取纯化等步骤。

目前石蜡切片样本DNA提取方法及试剂盒绝大部分还是以手工操作为主，整个操作流程需耗时4个小时以上；也有很少部分可以采用自动化仪器提取，但此类自动化仪器需要具有机械臂移液功能，加热模块及磁吸附模块等，属于较大型的自动工作站，虽然单次提取通量高，但整个工作站仪器昂贵，安装运营成本高，适用性不高，不适合单次提取样本数量少，应用灵活场景的单位，如经费较少的科研机构、高校实验室及相关企事业单位等。近年来小型化、较少通量的半自动化核酸提取仪发展迅速，小型化核酸提取仪已经广泛应用于市场上。

小型化、较少通量的自动提取仪的特点为仅通过移动磁棒的方式，将吸附有DNA的吸附DNA的磁珠在各buffer溶液中转移，通过磁棒的螺旋振动等方式将吸附DNA的磁珠与试剂溶液混匀，并最终达到核酸提取纯化的目标，整个过程没有液体移取步骤，这就使得很多需要分步添加试剂的核酸提取试剂无法应用在此类自动化提取仪上。目前此类小型化半自动核酸提取仪已广泛应用于如血液DNA提取、唾液DNA提取、口腔拭子DNA提取、肌肉组织DNA的提取。

常规的手动法石蜡切片样本DNA提取试剂盒或者基于移液工作平台的石蜡切片样本DNA提取试剂盒，其一般提取流程为：①石蜡切片样本二甲苯脱蜡，手动吸取或机械臂吸取一定体积的二甲苯溶液加入到有石蜡切片样本的反应孔中，溶蜡后再吸弃二甲苯溶液；②吸取无水乙醇加入到已脱蜡的石蜡切片样本中，洗涤残留的二甲苯溶液，再吸弃无水乙醇；③加热装置将FFPE残留的无水乙醇烘干；④接着手动或者仪器机械臂吸取蛋白酶K与组织裂解液加入到第③步的样品管中，50～60℃孵育30～60分钟后，再手动或者仪器机械臂吸取一定体积的DNA结合液加入到第④步溶液中，用吸头吹打方式混匀液体；⑤加入一定体积的无水乙醇后，将全部液体转移至DNA吸附膜，或者加入DNA吸附吸附DNA的磁珠；⑥再进行两步洗涤纯化步骤，得到最终的石蜡切片样本DNA溶液。因此石蜡切片样本DNA提取操作步骤繁琐，而在整个提取过程中需要经过多次吸液移液过程，无法适配应用于无机械臂移取液体的半/全自动小型核酸提取仪上，而一般的高校实验室、样本量较少的企事业单位在无能力购买或者无必要购买较大型的且昂贵的移液工作站设备情况下，只能手工操作提取，不但耗时长而且严重制约生产效率。

发明内容

基于此，本发明提供一种石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液、试剂盒及方法。所述脱蜡裂解结合液可将样本脱蜡、组织裂解和DNA结合在一步中完成，简化了操作步骤，有效节省了操作时间和人力成本，适用范围广。

本发明的目的之一在于提供一种石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液。

具体技术方案为：