[发明专利]一种石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种均一液态的石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液，其特征在于，所述脱蜡裂解结合液包含以下浓度的组分：石蜡油30~40v/v%、无水乙醇5~8.5v/v%、Tris-HCl 50~400mM、盐酸胍3~6M、尿素2.5~4M、NaCl 0.2~0.8M、SDS 0.5~3.5 w/v%、曲拉通X-100 0.2~0.8v/v%、亚精胺0.2~0.8w/v%，余量为水;

所述脱蜡裂解结合液的pH值为4.5~6.5；

所述脱蜡裂解结合液还包含终浓度为0.5~1.5mg/mL蛋白酶K。

2.根据权利要求1所述的石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解液，其特征在于，所述蛋白酶K在所述脱蜡裂解结合试液中的浓度是：0.8-1.2mg/mL。

3.根据权利要求1-2任一项所述的石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将Tris-HCl、盐酸胍、尿素、NaCl、SDS、曲拉通X-100和亚精胺溶解于水中，混匀，得到水相试剂；

（2）将液态脱蜡试剂石蜡油加入无水乙醇中，混匀，得到油相试剂；

（3）向步骤（2）的油相试剂中加入步骤（1）获得的水相试剂，然后加入余量水，混匀，得到脱蜡裂解结合液。

4.一种石蜡切片样本DNA提取试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-2任一项所述的石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液、吸附DNA的磁珠。

5.根据权利要求4所述的石蜡切片样本DNA提取试剂盒，其特征在于，还包括有洗涤液、漂洗液、DNA洗脱液。

6.根据权利要求5所述的石蜡切片样本DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包含以下浓度的组分：盐酸胍10~70 w/v%、曲拉通X-100 1~20v/v%。

7.根据权利要求5所述的石蜡切片样本DNA提取试剂盒，其特征在于，所述漂洗液包含以下浓度的组分：无水乙醇50~80 v/v%、NaCl 0.1~0.5M。

8.一种石蜡切片样本DNA提取方法，其特征在于，包含以下步骤：

（1）向石蜡切片样本中加入权利要求1-2任一项所述的石蜡切片样本DNA提取的脱蜡裂解结合液，混匀，于60℃~70℃孵育60min~80min；

（2）向步骤（1）混合液中加入吸附DNA的磁珠，混匀；

（3）分离步骤（2）中的吸附DNA的磁珠；

（4）向吸附DNA的磁珠中加入洗涤液进行洗涤，然后分离吸附DNA的磁珠，弃液体；

（5）向吸附DNA的磁珠中加入漂洗液进行洗涤，然后分离吸附DNA的磁珠，弃液体；

（6）重复步骤（5）一次；

（7）向吸附DNA的磁珠中加入DNA洗脱液进行洗脱；分离吸附DNA的磁珠，收集液体，即得到DNA溶液。

9.根据权利要求8所述的石蜡切片样本DNA提取方法，其特征在于，于60℃~70℃孵育60min~80min包括：于60℃~70℃水浴锅中放置60min~80min分钟，期间每隔13-17分钟迅速取出涡旋混匀并重新放回水浴锅中。

10.根据权利要求9所述的石蜡切片样本DNA提取方法，其特征在于，于65℃孵育70min，期间每隔15分钟迅速取出涡旋混匀并重新放回水浴锅中。

11.根据权利要求8-10任一项所述的石蜡切片样本DNA提取方法，其特征在于，向步骤（1）混合液中加入吸附DNA的磁珠，混匀，包括：使步骤（1）混合液温度恢复至15~30℃，然后加入吸附DNA的磁珠，涡旋混匀，静置13~18min。