[发明专利]一种核酸提取试剂盒及提取核酸的方法

说明书

本发明公开了一种核酸提取试剂盒及提取核酸的方法，属于分子生物学领域，该核酸提取试剂盒包括裂解液、洗涤液I和洗涤液II；所述裂解液包括Tris、EDTA、Tween20、二硫苏糖醇和异硫氰酸胍该提取核酸的方法，将裂解液、核酸附着物和待提取样品混合，得到吸附有核酸的核酸附着物；再依次采用洗涤液I、洗涤液II和洗脱液清洗吸附有核酸的核酸附着物，每次清洗后固液分离并收集上清液，得到核酸。本发明提供的核酸提取试剂盒和核酸提取方法，能够充分有效地裂解细胞，裂解效率高，得到浓度更高、纯度更高的核酸，保证后续操作的准确性，同时无需进行离心等操作，操作简单，一次提取均在1h内，提高了提取的效率。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种核酸提取试剂盒及提取核酸的 方法。

背景技术

根据世界卫生组织(WHO)2012年公布的全球疾病负担排序，下呼吸道感 染居第四位，仅次于缺血性心脏病、脑卒中和慢性阻塞性肺疾病；而在低收入 国家下呼吸道感染居死亡原因首位。目前国际上对肺炎进行长期动态的监测的 研究组织——美国和欧洲肺炎研究网络(CAPO和CAPNEZ)，该组织已成立近 20年，为肺炎流行病学、病原诊断、治疗方法和预防提供了大量的循证医学证 据，但我国仍缺乏这方面的长期动态研究，尤其是对病毒性肺炎的认识更不足。

肺泡灌洗液是研究下呼吸道感染的一种最重要样本类型，是作为病毒性肺 炎，细菌肺炎和真菌肺炎检测较为理想的样本，其阳性检出率高于痰液；但肺 泡灌洗液的采样，如BAL操作时混血，大气道分泌物混入，吸引负压大小，对 关系量回收量都会产生影响，采样到微生物的量会存在很大差异，加之肺泡灌 洗液比较粘稠，对其中微生物的提取存在较大困难。

微生物核酸的提取是能否准确检出病原菌的首要要素，现在市面上存在的 核酸提取试剂盒，有很少是专门针对肺泡灌洗液这类样本的，BAL中提取微生 物核酸的就更为稀少了，这就会造成BAL中微生物的提取效率偏低，极有可能 出现假阴性的情况

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种 用于提取肺泡灌洗液中核酸的核酸提取试剂盒及提取核酸的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种核酸提取试剂盒， 包括裂解液、洗涤液I和洗涤液II；所述裂解液包括Tris、EDTA、Tween20、二 硫苏糖醇和异硫氰酸胍。

本发明采用的另一种技术方案为：一种提取核酸的方法，包括以下步骤：

步骤1、将裂解液、核酸附着物和待提取样品混合，得到吸附有核酸的核酸 附着物；

步骤2、依次采用洗涤液I、洗涤液II和洗脱液清洗吸附有核酸的核酸附着 物，每次清洗后固液分离并收集上清液，得到核酸；

所述裂解液包括Tris、EDTA、Tween20、二硫苏糖醇和异硫氰酸胍；

所述洗脱液为无核酸水。

本发明的有益效果在于：本发明提供的核酸提取试剂盒适用于肺泡灌洗液 中的核酸提取，能够有效避免样本中混血和分泌物的干扰，试剂盒中的裂解液 用于肺泡灌洗液的核酸提取，能破坏待提取样品的细胞膜和或者细胞壁，高效 裂解样本，使待提取样品中的核酸绝大部分得到释放，同时可保护核酸的稳定 与完整，配合洗脱液I和洗涤液II，所得核酸浓度更高，且稳定性和完整性更高， 使得提取效率最大化，得到高质量的核酸，确保后续应用的准确性和稳定性。 该试剂盒配方合理，能够去除提取的核酸的杂质，获得高纯度的核酸，所得核 酸能够直接用于琼脂糖凝胶电泳检测及聚合酶链式反应、酶切反应、基因文库 构建等操作中。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予 以说明。