[发明专利]一种雌二醇均相化学发光检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种雌二醇均相化学发光检测试剂盒，其包括：第一组合物，其包含第一受体微球以及与之结合的第一抗体，所述第一抗体是特异性结合雌二醇检测抗体；第二组合物，其包含第二受体微球以及与之结合的第二抗体，所述第二抗体是特异性结合雌二醇检测抗体；第三组合物，其包含与雌二醇竞争结合所述检测抗体的竞争抗原；所述第一抗体与雌二醇特异性结合的亲和力高于所述第二抗体与雌二醇特异性结合的亲和力；同时，所述第一抗体与第一受体微球的质量比低于所述第二抗体与第二受体微球的质量比。例用该试剂盒检测雌二醇时，同时具有优异的功能灵敏度和检测范围。

技术领域

本发明属于均相化学发光检测技术领域，具体涉及一种雌二醇均相化学发光检测试剂盒及其应用。

背景技术

雌二醇(Estradiol-17β，E2)是生物活性最强的雌性激素，主要由卵巢产生的17β-雌二醇，是以睾酮为前体合成。卵泡期由颗粒细胞和内膜细胞分泌，黄体期由黄体细胞分泌，肾上腺皮质和睾丸也能少量分泌。妇女怀孕期主要由胎盘分泌。雌二醇的主要功能是促进女性生殖上皮、乳腺、子宫、长骨的生长及第二性征的发育，参与脂质代谢，调节血管平滑肌细胞和内皮细胞的许多功能，在排卵的控制机制中起着核心作用。此外，雌二醇同时具有防止骨质疏松、减少心血管疾病风险，调剂下丘脑等作用。另外，雌激素在女性妊娠过程中也发挥着重要的作用。在这一时期，雌激素的产生是正常排卵妇女平均每日雌激素合成的l000倍，孕期母体内E2占主导地位，其水平也达到非孕妇女的1000倍。雌二醇检测是检查下丘脑-垂体-性腺轴功能的指标之一，E2的水平可用于原发性或继发性性早熟、下丘脑、垂体和性腺相关疾病的鉴别与辅助诊断，以及闭经或月经异常时对卵巢功能的评价等。

准确定量分析血清雌二醇(E2)的方法起源于免疫放射分析技术，因放射性污染因素，临床实验室已不再使用。如今，血清E2定量分析的主流方法是发光免疫分析，包括酶促化学发光(贝克曼公司产品)、吖啶酯化学发光(西门子公司产品)和电化学发光(罗氏公司产品)。因E2是小分子半抗原，单一抗原表位，需采用双抗原竞争分析模式，即待检雌二醇和标记雌二醇竞争限量抗体。以上三种主流发光免疫分析方法，虽然所用标记物不同，但是具备共同特点即均属于非均相免疫分析(Heterogeneous immunoassay)。非均相免疫分析是指在抗体-抗原反应后、检测信号前，需要分离去除未参加反应的、游离状态的标记抗体或标记抗原；此时，检测结合状态的结合标记物的信号强度，可通过数学函数可获得待测抗原或抗体的含量。分离结合标记物和游离标记物常用的方法是固相吸附分离技术。

虽然，固相吸附分离方法具有简单、快速等众多优点，但是，由于每次洗涤过程需要消耗时间，也必然由于洗涤分离所带来“误差”。据文献报道，洗涤误差是非均相免疫分析误差的重要来源，影响分析方法的精密度，从而影响分析方法的准确度和灵敏度。此外，雌二醇为小分子物质，如标记酶分子会对其免疫活性(结合抗体能力)产生影响。同时，竞争法要求两个抗原(待检抗原和标记抗原)对抗体的竞争能力相同或相似，才能形成均衡竞争方式。小分子雌二醇与大分子酶结合，会造成空间位阻，影响与抗体分子的结合。

针对人体雌二醇(E2)检测项目，临床要求较宽的检测区间，一般商品化试剂盒校准品范围低于0-4800pg/ml，换言之，临床实验室血清E2项目对功能灵敏度和检测范围要求较高。现有的分析方法不能满足要求，高值样本和低值样本难于兼顾。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种雌二醇均相化学发光检测试剂盒，利用该试剂盒检测雌二醇时，同时具有优异的功能灵敏度和检测范围。

为此，本发明第一方面提供了一种雌二醇均相化学发光检测试剂盒，其包括如下组分：

第一组合物，其包含第一受体微球以及与之结合的第一抗体，所述第一抗体是特异性结合雌二醇检测抗体；

第二组合物，其包含第二受体微球以及与之结合的第二抗体，所述第二抗体是特异性结合雌二醇检测抗体；

第三组合物，其包含与雌二醇竞争结合所述检测抗体的竞争抗原；