[发明专利]一种从植物叶片中提取纯化内质网及其蛋白的有效方法

权利要求书

1.一种从植物叶片中提取纯化内质网及其蛋白的有效方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)对植物叶片进行组织破碎，并研磨成匀浆；所述的植物叶片为桑叶、铁线莲叶或十大功劳的叶片；

2)对植物叶片组织匀浆进行离心分离内质网；

3)对内质网进行裂解提取蛋白；

所述的步骤2)具体为：

(1)将步骤1)得到的植物叶片匀浆分装于离心管中，在0-10℃条件下以800-1200× g转速离心10-30分钟，收集上清液；

(2)将上述上清液分装至干净并预冷的超速离心管中，在超速冷冻离心机中，0-10℃条件下以10000-15000× g转速离心10-30分钟，收集上清液；

(3)将上述上清液分装至干净并预冷的超速离心管中，在0-10℃条件下以60000-150000× g转速离心30-120分钟，去掉上清液，取沉淀即为内质网；

所述的步骤3)具体为：

(1)裂解液现用现配，在每5mL RIPA lysis中加入50μL 100× PMSF即得；

(2)在步骤2)得到的内质网沉淀中加入200-500μL裂解液，用洗净并预冷的匀浆杵在离心管中将沉淀研磨、重悬以裂解，将重悬液吸出至干净并预冷的离心管中；

(3)加入30-100μL裂解液冲洗离心管和匀浆杵，汇总到重悬液中即得到植物叶片的内质网蛋白，置于-80℃保存或立即进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种从植物叶片中提取纯化内质网及其蛋白的有效方法，其特征在于，所述的植物叶片为桑叶、铁线莲叶或十大功劳的叶片。

3.根据权利要求1所述的一种从植物叶片中提取纯化内质网及其蛋白的有效方法，其特征在于，所述的步骤1)具体为：

(1)取新鲜植物叶片，用清水洗净擦干，得到用于后续实验的干净植物叶片；

(2)取上述组织叶片，将其剪碎为0.2～2.0cm，置预冷的研钵中，每1g叶片加1-5mL预冷的研磨缓冲液和1-10μL 100× 的蛋白酶抑制剂，于冰上研磨成匀浆。