[发明专利]橘青霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法

权利要求书

1.一种橘青霉素胶体金检测卡，它是在长条扁平壳状的检测卡外壳6中设置试纸条5，检测卡外壳表面有加样孔1和检测孔4，试纸条是由PVC胶板9上依次固定样品垫7、胶体金膜8、包被膜10和吸水棉11所组成；PVC胶板9一端叠置粘贴吸水棉11，另一端叠置粘贴样品垫7，中部叠置粘贴包被膜10，包被膜10两端分别与样品垫7后端面和吸水棉11的前端面搭接，在样品垫7与包被膜10的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜8；其特征在于胶体金膜为含橘青霉素单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有一条包被有橘青霉素蛋白偶联物的检测线2和一条包被有兔抗鼠抗体的质控线3，试纸条5置入检测卡外壳6内，样品垫7正对加样孔1，包被膜10正对检测孔4。

2.权利要求1所述的橘青霉素胶体金检测卡的制备方法，其特征在于由以下步骤实现：

胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；

抗体的预处理：将要标记的橘青霉素抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS 稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS 稀释成1 mg/ml，过0.22µm滤膜；

胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40 mL，用0.25 mol/L K₂CO₃调节胶体金溶液pH至 8.5，电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 抗体蛋白的蛋白溶液，反应10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温低速（1500 r/min）离心20 min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000 r/min 离心20 min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL，制备成橘青霉素单克隆抗体胶体金标记物；

胶体金膜的制备：将步骤(3)橘青霉素蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5 µl/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含橘青霉素蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；

包被膜制备：将兔抗鼠抗体、橘青霉素抗原稀释成1 mg/mL，用划膜仪依次以1 µl/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2 h后，室温自然晾干或者37℃烘干；

样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；

检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。