[发明专利]一种快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸

权利要求书

1.一种快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸，其特征是，包括PVC底板（7），所述PVC底板（7）依次设有样品垫（1）、微球探针处理垫（2）、改性硝酸纤维素膜（5）和吸水垫（6），PVC底板（7）中间设有改性硝酸纤维素膜（5），所述改性硝酸纤维素膜（5）两端分别设有微球探针处理垫（2）和吸水垫（6），所述微球探针处理垫（2）和所述吸水垫（6）一端底侧分别连接于所述改性硝酸纤维素膜（5）的两端，另一端底侧分别与PVC底板（7）连接；微球探针处理垫（2）与PVC底板（7）连接的一端上侧设有样品垫（1），所述样品垫（1）一端底侧与微球探针处理垫（2）上侧连接，另一端底侧与PVC底板（7）连接，所述改性硝酸纤维素膜（5）的非连接段从微球探针处理垫（2）一侧开始依次设有包被鼠抗布鲁氏菌抗体的检测线T（3）和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C（4）。

2.根据权利要求1所述一种快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸，其特征是，所述微球探针处理垫（2）为标记布鼠抗鲁氏菌抗体-胶体金偶联物的金标垫。

3.根据权利要求1所述一种快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸，其特征是，所述检测线T（3）包被的包被用鼠抗布鲁氏菌抗体浓度为0.1~1.0mg/ml。

4.根据权利要求1所述一种快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸，其特征是，所述质控线C（4）包被的羊抗鼠IgG抗体浓度为1.0~3.0mg/ml。

5.根据权利要求2所述一种快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸，其特征是，所述胶体金颗粒直径为40-100nm，此处标记后鼠抗布鲁氏菌单克隆抗体-胶体金偶联物的使用浓度应为OD1-OD4。

6.如权利要求1-5任一所述快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，其特征是，具体包括以下步骤：

1）制备检测线T和质控线C：分别将鼠抗布鲁氏菌抗体和羊抗鼠IgG抗体溶液稀释后分别以1.0-1.2ul/cm的速度喷点于硝酸纤维素膜上分别作为检测线T和质控线C，置于36-38℃烘干，得到检测线和质控线；

2）金标垫的制备：将纯化的金标抗体稀释后浓度为OD1-OD4时包被于玻纤垫上置于冷冻干燥机处理，制得金标垫；

3）制备检测试纸：将吸水垫（6）、样品垫（1）、微球探针处理垫（2）、包被好抗体的改性硝酸纤维素膜（5）及PVC底板（7）按顺序进行连接组装，即得成品。

7.根据权利要求6所述快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，其特征是，所述纯化的金标抗体的制备过程：

A、获得胶体金：在98-102ml沸腾的0.008-0.012%氯金酸水溶液中加入1.8-2.2ml的0.8-1.2%柠檬酸三钠水溶液，可获得直径为65-75nm的胶体金；

B、标记胶体金：用0.18-0.22 mol/L的K₂CO₃溶液调节上述胶体金的pH至8.4-8.6，将标记用鼠抗布鲁氏菌抗体加入到调整pH后的胶体金中，标记20-25min；

C、纯化金标抗体：向步骤B的标记胶体金溶液中加入质量分数8-12％的BSA水溶液，至BSA的终浓度为0.8-1.2％，后停止加入，继续搅拌25-30min，继续加入8-12％PEG20000至PEG20000终浓度为0.18-0.22％，继续搅拌10-15min，离心，弃上清液，即得纯化金标抗体。

8.根据权利要求7所述快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，其特征是，步骤B中标记用鼠抗布鲁氏菌抗体与调整pH后的胶体金的体积比为1:1-1.2。

9.根据权利要求7所述快速诊断布鲁氏菌病的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，其特征是，步骤C中的离心条件为：离心温度4-6℃，离心转速9900-10000rpm，离心时间30-40min。