[发明专利]一种纯化维生素B2的方法

说明书

本发明涉及一种快速纯化维生素B2的方法，将正丁醇、乙晴、(NH₄)₂SO₄和水混合得到两相溶剂体系，待溶剂体系分成后，分离得到上相固定相和下相流动相，分别用上相固定相和下相流动相溶解样品，分别得到上相液和下相液；通入高速逆流色谱中进行洗脱，具体步骤为：将得到的上相液通入高速逆流色谱的分离管中，然后注入得到的下相液，将分离管中的溶解液利用高速逆流色谱仪进行监测并收集馏分，合并相同成分，得到纯化后的产品。纯化后的产品中维生素B2的纯度大于98％。

技术领域

本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及一种快速纯化维生素B2的方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

维生素B2又叫核黄素，为体内黄酶类辅基的组成部分(黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用)，当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等，故本品可用于上述疾病的防治。但是摄取过多，可能引起瘙痒、麻痹、流鼻血、灼热感、刺痛等。而且如果正在服用抗癌药，如氨甲喋呤(methotrexate)的话，则过量的B2会减低这些抗癌剂的效用。因此维生素B2的临床检测非常有必要。近年来随着色谱、质谱技术的发展，急需高纯度的维生素B2用于维生素B2的临床检测。

目前，维生素B2的生产方法主要是有植物体提取法、化学合成法、微生物发酵法和半微生物发酵法，提取方法主要有重金属盐沉淀法、酸溶法、碱溶法等，但是，采用上述方法得到的维生素B2的纯度较低(98％)。高速逆流色谱技术是一种液-液分配色谱技术，无固态载体，因此，可以避免死吸附引起的样品损失，在天然产物的分离纯化领域得到广泛应用。该技术具有适用范围广、无不可逆吸附、制备量大和分离效率高等优点。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种快速纯化维生素B2的方法。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：

一种快速纯化维生素B2的方法，将正丁醇、乙晴、(NH₄)₂SO₄和水混合得到两相溶剂体系，待溶剂体系分成后，分离得到上相固定相和下相流动相，用等体积的上相固定相和下相流动相混合溶解样品，得到样品溶液；

将得到的样品溶液通入高速逆流色谱中进行洗脱，具体步骤为：将得到的上相通入高速逆流色谱的分离管中，分离管中充满上相后注入下相流动相，当螺旋管中的上下相达到平衡时(有下相流出)，将样品溶液注入进样环中，将从分离管中流出的溶液利用紫外检测器进行监测并收集馏分，合并相同成分，得到纯化后的产品。

本发明中发明人对现有的维生素B2样品进行纯化，纯化后样品(与实施例中的市售维生素B2产品相对应)中维生素B2的纯度大于95％，优选的实施例中纯度98％。本发明制备的溶剂体系，对现有的维生素B2样品中维生素B2和杂质的分离具有较好的效果。

高速逆流色谱是固定相和流动相都是液体的分离方法，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物质进行分离。两相溶剂体系与高速逆流色谱进行结合，使现有的维生素B2样品被洗脱，提高了分离效果。

在一些实施例中，正丁醇、乙晴、(NH₄)₂SO₄溶液和水的体积比为3～5:0.5～1:1～3:2～4。本发明的溶剂体系形成的两相溶剂，各个组分相互配合，得到上相固定相和下相流动相，两相进行配合，分别作为固定相和流动相，提高了样品的分离效果。优选的，正丁醇、乙晴、(NH₄)₂SO₄溶液和水的体积比为3:1:2.4:2。