[发明专利]一种纯化维生素B2的方法

权利要求书

1.一种纯化维生素B2的方法，其特征在于：将正丁醇、乙腈、(NH₄)₂SO₄和水混合得到两相溶剂体系，待溶剂体系分层后，分离得到上相固定相和下相流动相，用等体积的上相固定相和下相流动相混合溶解样品，得到样品溶液；

将得到的样品溶液通入高速逆流色谱中进行洗脱，具体步骤为：将得到的上相通入高速逆流色谱的分离管中，分离管中充满上相后注入下相流动相，当螺旋管中的上下相达到平衡时，将样品溶液注入进样环中，将从分离管中流出的溶液利用紫外检测器进行监测并收集馏分，合并相同成分，得到纯化后的产品；

其中，正丁醇、乙腈、(NH₄)₂SO₄溶液和水的体积比为3～5:0.5～1:1～3:2～4；

(NH₄)₂SO₄溶液的浓度为40-50％；

样品的维生素B2的纯度为85-95％。

2.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：溶解样品的两相溶剂体系的总体积与样品的质量比为2-3mL:10mg，上相固定相和下相固定相的体积相同。

3.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：上相固定相和下相流动相进入高速逆流色谱仪前进行超声脱气。

4.根据权利要求3所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：超声脱气的时间为8-12min。

5.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：上相固定相和下相流动相在高速逆流色谱中的洗脱过程的具体步骤为：上相液泵入高速逆流色谱仪的分离管中，直至有上相流出，保证固定相充满整个分离螺旋管，然后调节主机转速，色谱仪螺旋管柱按照顺时针的方向旋转，然后泵入下相，当螺旋管中的上下相达到平衡时，将溶解的样品溶液用注射器进入进样环中，旋转六通阀使样品注入高速逆流色谱仪中。

6.根据权利要求5所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：上相进入高速逆流色谱仪的速度为15-25ml/min，下相进入高速逆流色谱仪的速度为1-3ml/min，高速逆流色谱的主机转速为800-900rpm。

7.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：固定相保留率：66-68％。

8.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：利用紫外线检测器进行监测，紫外线检测波长为254nm，每个三分钟收集一个馏分，将收集到的馏分利用HPLC进行检测并合并相同的成分。

9.根据权利要求8所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：HPLC进行检测的条件为：Unitary C18柱，4.6mm×250mm,i.d.,5μm，流动相A：甲醇，流动相B：含20mM磷酸二氢钠的水；梯度洗脱程序：0-20min，23％A-75％A；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm。