[发明专利]一种红车轴草毛状根的诱导方法及增殖方法

权利要求书

1.一种红车轴草毛状根的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对红车轴草种子进行消毒和清洗处理后，再将红车轴草种子置于MS液体培养基中进行培养7~14天，得到红车轴草无菌苗；

（2）先取整株红车轴草无菌苗作为侵染材料；接着，将发根农杆菌侵染液注射到侵染材料的根中；然后，将注射有发根农杆菌侵染液的侵染材料接种于含有乙酰丁香酮的MS培养基中进行共培养处理；所述含有乙酰丁香酮的MS培养基中乙酰丁香酮的质量浓度为100mg/L；所述共培养处理的时间为48h；

（3）将上述共培养处理后的侵染材料取出，并转移到含有头孢噻肟钠的MS培养基中进行抑菌培养处理，得到诱导转化的毛状根；所述含有头孢噻肟钠的MS培养基中头孢噻肟钠的质量浓度为500mg/L；

所述发根农杆菌侵染液的制备方法包括以下步骤：先将发根农杆菌接种于含有氨苄青霉素的YEB固体培养基中进行暗培养，形成单菌落；接着，将单菌落接种于含有氨苄青霉素的YEB液体培养基中进行摇床振荡培养至OD600值为0.6~1，得到活化菌液；然后，将活化菌液接种于新鲜YEB液体培养基中进行摇床振荡培养至OD600值为0.5~1，得到所述的发根农杆菌侵染液。

2.根据权利要求1所述的一种红车轴草毛状根的诱导方法，其特征在于，所述的步骤（1）中，消毒处理的方法包括以下步骤：先用乙醇溶液对红车轴草种子进行初步消毒；接着，将初步消毒后的红车轴草种子用无菌水进行清洗；然后，将清洗后的红车轴草种子用氯化汞溶液进行再次消毒。

3.根据权利要求2所述的一种红车轴草毛状根的诱导方法，其特征在于，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为75%~90%。

4.根据权利要求2所述的一种红车轴草毛状根的诱导方法，其特征在于，所述氯化汞溶液中氯化汞的质量百分比浓度为0.1%~0.3%。

5.一种利用权利要求1-4中任一项所述的诱导方法得到的红车轴草毛状根的增殖方法，其特征在于，包括以下步骤：首先，往MS液体培养基中添加蔗糖，得到培养液；然后，将毛状根接种于上述培养液中，并置于24~32℃的恒温条件下进行摇床振荡培养20~30天。

6.根据权利要求5所述的一种红车轴草毛状根的增殖方法，其特征在于，所述培养液中蔗糖的添加量为25~35g/L。

7.根据权利要求5所述的一种红车轴草毛状根的增殖方法，其特征在于，所述毛状根的接种量为1~2g/L。

8.根据权利要求5所述的一种红车轴草毛状根的增殖方法，其特征在于，所述的步骤中，摇床振荡培养的摇床转速为100~120g/L。