[发明专利]一种血液mRNA检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种血液mRNA检测试剂盒及检测方法，包含SEQ ID NO.1～18所示的9对特异性多重PCR引物对和SEQ ID NO.19～34所示的16条SNP单碱基延伸引物，用于检测5种血液特异性mRNA分子上的16个SNP分子标记，可以完成从复杂混合斑中检测占比低至1%或含量低至0.1ng的血液RNA的操作，精准分离血液与其它体液、皮肤组织，快速、准确溯源并定位嫌疑人。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种血液检测试剂盒及检测方法。

背景技术

在法医工作中，复杂混合斑是最常见的生物检材之一，也一直是检验的重点、难点。复杂混合斑包括：（1）多人多种体液构成的混合斑；（2）构成比极度不平衡混合斑（其中一种成分构成比低于10%）。国内外分析多人多种体液构成的混合斑的主流技术是基于单细胞分离技术、毛细管电泳或二代测序平台对STR进行分型。

血液中部分mRNA分子具有体液和组织特异性，这些特异性mRNA只能在血液中表达和检测，其他体液不表达。目前在法医学中无法单独利用特异性mRNA分子对个体进行识别，仅主要用于推断体液斑种类鉴定、和联用mRNA、DNA共提取技术实现斑迹鉴定和个体识别。然而联用mRNA分子和DNA虽然达到了鉴定体液斑类型和个体识别的目的，但并没有解决复杂混合斑的问题。

二代测序平台虽然对简单混合斑有良好的分析能力，但分析复杂混合斑时，其在测序片段拼接、测序错误、对构成比不平衡混合斑微小成分的检测等方面有难以逾越的障碍。传统分析方法还会出现等位基因的丢失、新等位基因出现和影子带等事件，在分析时会受到多个个体分享同一等位基因的情况，造成鉴定结果的解释困难，出现主观偏差甚至错误。对于构成比极不平衡的混合斑，难以找到次要供者（10%）的细胞成分，导致始终无法突破对复杂混合斑检测灵敏度的瓶颈（5~10%）。

并且，传统方法只能利用混合斑中的分析结果与嫌疑人进行比对，因此利用混合斑中血液信息直接锁定嫌疑人较为困难，是目前针对复杂混合斑研究的一大难题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血液mRNA检测试剂盒及检测方法，从复杂混合斑中鉴定RNA占比低至1%或含量低至0.1ng RNA的血液样品，并实现对嫌疑人的主动查找。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

选择已报道的血液特异性mRNA分子，利用数据库筛选多态性好的SNP分子标记（0.1MAF0.5），SNP对应的来源于血液的5个特异性基因见表1。

所述血液mRNA检测试剂盒包括SEQ ID NO.1～18所示的9对特异性多重PCR引物对，以及SEQ ID NO.19～34所示的16条SNP单碱基延伸引物，用于检测以下16个SNP分子标记中的任意一个或数个：

rs3753058、rs3753059、rs1793174、rs2304871、rs17121881、rs229586、rs229587、rs77806、rs1626923、rs1741487、rs184528、rs1741488、rs7682260、rs7687256、rs7658293、rs4867。

其中，rs3753058、rs3753059的PCR引物对为序列SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物。

rs1793174的PCR引物对为序列SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物。

rs2304871的PCR引物对为序列SEQ ID NO.5所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物。

rs17121881的PCR引物对为序列SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.8所示的下游引物。