[发明专利]一种血液mRNA检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种血液mRNA检测试剂盒，包含SEQ ID NO.1～18所示的9对特异性多重PCR引物对，以及SEQ ID NO.19～34所示的16条SNP单碱基延伸引物，用于检测以下16个SNP分子标记：

rs3753058、rs3753059、rs1793174、rs2304871、rs17121881、rs229587、rs77806、rs1626923、rs1741487、rs184528、rs1741488、rs7682260、rs7687256、rs7658293、rs4867、rs229586。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，所述SEQ ID NO.1～18所示的9对特异性多重PCR引物对分别对应扩增以下所述的SNP分子标记：

rs3753058、rs3753059的PCR引物对为序列SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ IDNO.2所示的下游引物；

rs1793174的PCR引物对为序列SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物；

rs2304871的PCR引物对为序列SEQ ID NO.5所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物；

rs17121881的PCR引物对为序列SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.8所示的下游引物；

rs229586、rs229587的PCR引物对为序列SEQ ID NO.9所示的上游引物和SEQ ID NO.10所示的下游引物；

rs77806的PCR引物对为序列SEQ ID NO.11所示的上游引物和SEQ ID NO.12所示的下游引物；

rs1626923的PCR引物对为序列SEQ ID NO.13所示的上游引物和SEQ ID NO.14所示的下游引物；

rs1741487、rs184528、rs1741488的PCR引物对为序列SEQ ID NO.15所示的上游引物和SEQ ID NO.16所示的下游引物；

rs7682260、rs7687256、rs7658293、rs4867的PCR引物对为序列SEQ ID NO.17所示的上游引物和SEQ ID NO.18所示的下游引物。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，所述SEQ ID NO. 19～34所示的16条SNP单碱基延伸引物分别对应延伸以下所述的SNP分子标记：

rs3753058对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.19；rs3753059对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.20；rs1793174对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.21；rs2304871对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.22；rs17121881对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.23；rs229587对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.24；rs77806对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.25；rs1626923对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.26；rs1741487对应的延伸引物序列为SEQ IDNO.27；rs184528对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.28；rs1741488对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.29；rs7682260对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.30；rs7687256对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.31；rs7658293对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.32；rs4867对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.33；rs229586对应的延伸引物序列为SEQ ID NO.34。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征是每对特异性多重PCR引物的扩增产物中至少包含1个血液特异性mRNA分子上的SNP，最多包含4个。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征是mRNA上的16个SNP分子标记分别来源于5个血液特异性基因：SPTB、GYPA、CD3G、ANK1、AMICA1。

6.权利要求1所述检测试剂盒用于非疾病诊断的检测方法，包括以下步骤：

1）提取待测样本RNA作为模板，反转录为cDNA，利用所述SEQ ID NO.1～18所示的9对特异性多重PCR引物对，通过多重PCR得到扩增产物；

2）对扩增产物进行纯化处理，利用所述SEQ ID NO.19～34所示的16条SNP单碱基延伸引物，通过单碱基延伸体系得到延伸产物；

3）对延伸产物进行纯化处理，利用毛细管电泳、DNA测序仪和基因分析软件进行分析。