[发明专利]一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒及其制备方法和使用方法

说明书

本发明涉及一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒及其制备方法和使用方法，本发明试剂盒包括生物素化VEGF单克隆抗体，碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体，链霉亲和素磁珠，试剂盒适用于全自动化学发光免疫分析仪Lumiart‑II‑1，相比传统的ELISA试剂盒，全自动化操作减少手工误差，反应时间更短，灵敏度更高，实现高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提升，试剂盒可用于早期癌症风险筛查，肿瘤病人治疗疗效评估监测以指导用药、复发监测和预后等，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，具体涉及一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒及其制备方法和使用方法。

背景技术

肿瘤细胞的生长、发展和转移是多因素、多阶段的，涉及肿瘤细胞与宿主之间错综复杂的关系，机理尚不明确。近年来的研究发现，新的血管的生成与肿瘤发展，转移有密切联系。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor)是一种具有高度生物活性的功能性的信号转导蛋白，它能作用于血管内皮细胞，使其增殖、迁移、管腔形成，参与血管生成并使毛细血管通透性增加，导致肿瘤血管异常生长，阻碍抗肿瘤药物有效输送至肿瘤组织内，并可刺激新生血管生长因子增加。VEGF在几乎所有的实体肿瘤患者血液中的表达均比健康人群增高，是近年来研究较多的一种全新的广谱肿瘤标记物，对于血液中VEGF高表达的受检者，可以根据受检者体征，针对性地与其它肿瘤标志物联合筛查，一方面能大幅度提高检出率，另一方面可以确定某些肿瘤组织来源。

VEGF相对分子量为45kDa，是高度糖基化的碱性蛋白，两个相同的亚单位通过二硫键结合而成，由于外显子剪切的不同而形成不同的亚型，VEGF至少有五种不同的亚型，根据氨基酸的数目命名为：VEGF121,VEGF145,VEGF165,VEGF189,VEGF206。其中VEGF121,VEGF145,VEGF165是分泌性可溶性蛋白，直接作用于血管内皮细胞促进血管内皮增殖，增加血管通透性，VEGF165是VEGF的主要存在形式。

近年来，各种免疫分析技术的研究和应用发展迅速，广泛应用于临床疾病的辅助诊断等。目前用于检测人血清VEGF的方法主要是酶联免疫吸附法，但其检测灵敏度较低，检测范围窄，精确度不高，操作较为繁琐等。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题而提供一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒及其制备方法和使用方法，该试剂盒灵敏度高，特异性强，结果准确，使用简便。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒，包括生物素化VEGF单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体以及链霉亲和素磁珠。

优选地，所述的生物素化VEGF单克隆抗体中，VEGF单克隆抗体与生物素的摩尔质量比为1：45-55。

优选地，所述的碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体中，VEGF单克隆抗体与碱性磷酸酶标记物的质量比为1：1-2。

优选地，所述链霉亲和素磁珠的粒径为0.5-1.5微米。

一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒的制备方法，包括：

将生物素和VEGF单克隆抗体溶解于溶剂中，用脱盐柱脱盐处理，得到生物素化VEGF单克隆抗体；

用高碘酸钠法将碱性磷酸酶和VEGF单克隆抗体进行偶联，用脱盐柱脱盐处理，得到碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体。

优选地，所述生物素化VEGF单克隆抗体的具体制备方法为：

取VEGF单克隆抗体，用PBS缓冲液稀释，称取生物素用DMSO溶解，将二者室温混匀，用离心脱盐柱脱盐处理，收集离心管中的液体至保存管中得到生物素化VEGF单克隆抗体。