[发明专利]一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒及其制备方法和使用方法

权利要求书

1.一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒，其特征在于，包括生物素化VEGF单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体以及链霉亲和素磁珠。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒，其特征在于，所述的生物素化VEGF单克隆抗体中，VEGF单克隆抗体与生物素的摩尔质量比为1：45-55。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒，其特征在于，所述的碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体中，VEGF单克隆抗体与碱性磷酸酶标记物的质量比为1：1-2。

4.根据权利要求1所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠的粒径为0.5-1.5微米。

5.一种如权利要求1所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

将生物素和VEGF单克隆抗体溶解于溶剂中，用脱盐柱脱盐处理，得到生物素化VEGF单克隆抗体；

用高碘酸钠法将碱性磷酸酶和VEGF单克隆抗体进行偶联，用脱盐柱脱盐处理，得到碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体。

6.根据权利要求5所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述生物素化VEGF单克隆抗体的具体制备方法为：

取VEGF单克隆抗体，用PBS缓冲液稀释，称取生物素用DMSO溶解，将二者室温混匀，用离心脱盐柱脱盐处理，收集离心管中的液体至保存管中得到生物素化VEGF单克隆抗体。

7.根据权利要求5所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体的具体制备方法为：

(1)取碱性磷酸酶，用纯化水配制成溶液，加入等体积的高碘酸钠纯化水溶液，低温避光反应一段时间；

(2)加入与碱性磷酸酶溶液等体积的乙二醇溶液，低温避光反应一段时间，加入VEGF单克隆抗体，用离心脱盐柱脱盐处理，收集离心管中的液体；

(3)加入硼氢化钠溶液，低温避光反应一段时间，加入饱和硫酸铵溶液，再低温避光反应一段时间，离心，弃去上清，得到沉淀物；

(4)取沉淀物PBS溶解，用离心脱盐柱脱盐处理，收集离心管中的液体，得到碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体。

8.根据权利要求6或7所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，用PD SpinTrap G-25离心脱盐柱进行脱盐处理，脱盐过程中先用PBS预处理脱盐柱；

得到生物素化VEGF单克隆抗体或碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体，加入甘油混匀，于低于-20℃下保存。

9.根据权利要求7所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，

步骤(1)碱性磷酸酶浓度为10mg/mL；高碘酸钠浓度为12.8mg/mL；低温避光反应的温度为4℃，反应时间为0.5小时；

步骤(2)乙二醇溶液为体积比1％的乙二醇溶液；低温避光反应的温度为4℃，反应时间为45分钟；

步骤(3)按每毫克抗体加入20μL的量加入硼氢化钠溶液，所述硼氢化钠溶液的浓度为5mg/mL，低温避光反应的温度为4℃，反应时间为2小时。

10.一种如权利要求1所述的一种用于检测血管内皮生长因子的检测试剂盒的使用方法，其特征在于，以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，在反应杯中依次加入样品、生物素化VEGF单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的VEGF单克隆抗体，反应一段时间，再加入链霉亲和素磁珠，反应一段时间，进行磁分离，清洗液清洗数次，将反应杯送入暗室，加入化学发光底物液进行发光反应，并记录发光值。