[发明专利]反硝化细菌nirK基因绝对定量检测方法、引物和试剂盒在审
| 申请号： | 201911391574.5 | 申请日： | 2019-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN111088374A | 公开（公告）日： | 2020-05-01 |
| 发明（设计）人： | 汪义龙 | 申请（专利权）人： | 江苏为青生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 苏州知途知识产权代理事务所(普通合伙) 32299 | 代理人： | 陈瑞泷 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市昆山*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 硝化细菌 nirk 基因 绝对 定量 检测 方法 引物 试剂盒 | ||
1.一种高效扩增反硝化细菌nirK基因绝对定量检测引物，其特征在于，所述引物的序列为：
nirK_F：GGCGACTATGTCTGGGAGA
nirK_R：CGATCAGGTTATGGTTGACG。
2.一种反硝化细菌nirK基因绝对定量检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的检测引物。
3.一种高效扩增反硝化细菌nirK基因绝对定量检测引物在检验土壤中反硝化细菌Cu型亚硝酸盐还原酶的应用。
4.一种反硝化细菌nirK基因绝对定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
对反硝化细菌的nirK基因进行DNA的提取，获得待检样品；
使用权利要求1所述的引物对待检样品进行PCR扩增反应；
对PCR扩增产物进行检测。
5.根据权利要求4所述的反硝化细菌nirK基因绝对定量检测方法，其特征在于，定量PCR扩增反应体系为：
qPCR Mix：10ul，
Primer_F+R：2ul，
DNA模板：8ul。
6.根据权利要求4所述的反硝化细菌nirK基因绝对定量检测方法，其特征在于，反硝化细菌来自土壤。
7.根据权利要求6所述的反硝化细菌nirK基因绝对定量检测方法，其特征在于，采用天根土壤基因组DNA提取试剂盒(DP336)提取DNA。
8.根据权利要求7所述的反硝化细菌nirK基因绝对定量检测方法，其特征在于，将天根土壤基因组DNA提取试剂盒(DP336)洗脱后的溶液将样品稀释30倍得到待检样品。
9.根据权利要求4所述的反硝化细菌nirK基因绝对定量检测方法，其特征在于，PCR扩增反应步骤为：
预变性：温度95℃，时间10min，循环数1次；
变性：温度95℃，时间10sec；
退火延伸：温度60℃下时间为40sec，循环数40次。
10.根据权利要求9所述的反硝化细菌nirK基因绝对定量检测方法，其特征在于，退火延伸后进行溶解曲线采集，
所述溶解曲线采集的条件为：温度95℃下15sec，温度60℃下60sec，温度95℃下30sec，温度60℃下15sec，循环数1次。
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