[发明专利]一种高效提取MicroRNA的方法

说明书

本发明公开了一种高效提取MicroRNA的方法，包括如下步骤：（1）向经裂解后的样本中加入含有金属阳离子的第一杂质去除液以及第二杂质去除液，所述第二杂质去除液为水混溶性醇；（2）沉淀杂质，离心分离后取含有MicroRNA的上清液；（3）从含有MicroRNA的上清液中分离MicroRNA。本发明耗时短，步骤简单，提取效率高。

技术领域

本发明涉及RNA提取技术领域，特别涉及一种高效提取MicroRNA的方法。

背景技术

微小核糖核酸（MicroRNA）是一种大小为22nt左右的非编码单链RNA，其主要功能是参与基因表达与调控。它在组织和血液中都存在，并且MicroRNA有着高度的稳定性。MicroRNA已被证明跟疾病的发生有相关性，特别是在肿瘤发生过程中起到至关重要的作用，是一种潜在的疾病监测标志物。但MicroRNA大小为22nt左右，提取一直是一个较大的难题，步骤越多，提取效率一般越低下，在吸附时，往往会优先吸附长链RNA，导致MicroRNA等短链RNA流失，所以目前MicroRNA提取效率不高。因此，提供一种高效简便提取MicroRNA的方法就显得非常重要。

目前市场上专门用于提取MicroRNA的方法主要是通过Trizol溶液裂解细胞，再通过氯仿对溶液进行分层去除蛋白质，往核酸溶液中加醇进行长链核酸的沉淀，过柱吸附长链核酸，再添加醇提高醇浓度，沉淀MicroRNA，再过柱吸附，洗涤后分离。如以提取总RNA的方式提取MicroRNA，则提取效率不高，因为不管啥分离方式，MicroRNA往往会先损失。另外专门提取MicroRNA的方式则过程过于繁琐，耗时较长，容易造成MicroRNA降解。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效提取MicroRNA的方法，耗时短，步骤简单，提取效率高。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种高效提取MicroRNA的方法，包括如下步骤：

（1）向经裂解后的样本中加入含有金属阳离子的第一杂质去除液以及第二杂质去除液，所述第二杂质去除液为水混溶性醇；

（2）沉淀杂质，离心分离后取含有MicroRNA的上清液；

（3）从含有MicroRNA的上清液中分离MicroRNA。

样本裂解具体操作为：取100-400μL样本，加入60-240μL的裂解液，涡旋震荡3-10S后，室温静置2-5min。

加第一杂质去除液和第二杂质去除液是同时进行的，而无需在其中进行离心或洗涤。

所述金属阳离子包括Zn²⁺、Al³⁺中的一种或几种。金属阳离子的提供源为氯化锌、硫酸锌、氯化铝等。

所述第一杂质去除液的中各组分配比如下：0.7-1.2M金属阳离子，30%-60% 二甲基亚砜，0.4-1M乙酸钠，2%-5%醋酸。

所述第二杂质去除液的用量为经裂解后的样本和第一杂质去除液总体积的15%-35%，所述水混溶性醇选自乙醇、异丙醇中的一种或几种。

所述第一杂质去除液的用量为样本体积的0.5-2倍。

用于样本裂解的裂解液种各组分配比如下：3-8M盐酸胍，3%-12%表面活性剂；所述表面活性剂选自SDS、辛苯昔醇、NP-40、Tween 20中的一种或几种。裂解液的作用不止是裂解细胞，MicroRNA是和蛋白结合在一起的，裂解液也能裂解，释放出MicroRNA，比如裂解血清。