[发明专利]一种高效提取MicroRNA的方法

权利要求书

1.一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）向经裂解后的样本中加入含有金属阳离子的第一杂质去除液以及第二杂质去除液，所述第二杂质去除液为水混溶性醇；

（2）沉淀杂质，离心分离后取含有MicroRNA的上清液；

（3）从含有MicroRNA的上清液中分离MicroRNA。

2.根据权利要求1所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于：所述金属阳离子包括Zn²⁺、Al³⁺中的一种或几种。

3.根据权利要求1或2所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于：所述第一杂质去除液的中各组分配比如下：0.7-1.2M金属阳离子，30%-60% 二甲基亚砜，0.4-1M乙酸钠，2%-5%醋酸。

4.根据权利要求1所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于：所述第二杂质去除液的用量为经裂解后的样本和第一杂质去除液总体积的15%-35%，所述水混溶性醇选自乙醇、异丙醇中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于：所述第一杂质去除液的用量为样本体积的0.5-2倍。

6.根据权利要求1所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于：用于样本裂解的裂解液种各组分配比如下：3-8M盐酸胍，3%-12%表面活性剂；所述表面活性剂选自SDS、辛苯昔醇、NP-40、Tween 20中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于：从含有MicroRNA的上清液中分离MicroRNA 具体步骤如下：将异丙醇与含有MicroRNA的上清液等体积混合，加入无RNA酶的吸附柱中，离心，弃去液体，然后漂洗，最后，离心后换收集管，加入RNase-free水，离心并收集液体以获得MicroRNA。

8.根据权利要求7所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于：

所述漂洗过程如下：

一次漂洗：加入第一漂洗液，离心，倒掉液体；

二次漂洗：加入第二漂洗液，离心，倒掉液体；

三次漂洗：加入第二漂洗液，离心，倒掉液体；

所述第一漂洗液为浓度2-5M的盐酸胍水溶液，所述第二漂洗液为质量浓度70%-90%乙醇。

9.根据权利要求1所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于：所述样本包括血清样本、血浆样本、尿液样本、唾液样本。

10.根据权利要求1所述的一种高效提取MicroRNA的方法，其特征在于，具体操作步骤如下：

A、样本的裂解：取100-400μL样本，加入60-240μL的裂解液，涡旋震荡3-10S后，室温静置2-5min；

B、杂质的去除：向步骤A处理后的样本中加50-200μL 第一杂质去除液，接着加入第二杂质去除液，涡旋震荡10-30S，冰上静置2-5min；将样本离心，取上清液转移至新的离心管；

C、MicroRNA分离：向步骤B所得上清液中加入等体积的异丙醇，涡旋震荡3-10S后，加入到RNase-free吸附柱中，离心，倒掉液体，然后进行漂洗，所述漂洗过程如下：

一次漂洗：加入500-1000μL第一漂洗液，离心，倒掉液体；

二次漂洗：加入300-700μL第二漂洗液，离心，倒掉液体；

三次漂洗：加入300-700μL 第二漂洗液，离心，倒掉液体；

最后，离心后换收集管，加入25-50μL RNase-free水，离心，收集液体即得MicroRNA。