[发明专利]一种高通量测序文库构建的DNA转化效率的检测方法

权利要求书

1.一种高通量测序文库构建的DNA转化效率的检测方法，其特征在于，利用用于模拟真实样品末端情况的模拟DNA模板进行文库构建，分别将构建得到的文库以及构建得到的文库与所述模拟DNA模板的混合物进行毛细管电泳检测，分析其中未连接接头的DNA片段的浓度以及两端连接接头的DNA片段的浓度，计算两端连接接头的DNA片段在所述文库中所占比例；

以所述文库为待检片段溶液，以所述文库与所述模拟DNA模板的混合物为对照片段溶液，所述待检片段溶液中所述文库的含量与所述对照片段溶液中所述文库的含量相等，且所述对照片段溶液中所述文库与所述模拟DNA模板含量相等，所述DNA转化效率的计算公式如下：

其中，T为DNA转化效率，T1为所述文库中未连接接头的DNA片段的浓度，S1为所述文库中两端连接接头的DNA片段的浓度，T2为所述文库与所述模拟DNA模板的混合物中未连接接头的DNA片段的浓度，S2为所述文库与所述模拟DNA模板的混合物中两端连接接头的DNA片段的浓度；

所述模拟DNA模板包括目的序列以及位于目的序列两侧的侧翼序列；

所述侧翼序列的长度为50~150 bp；

所述模拟DNA模板的长度为100~350bp；所述目的序列的末端碱基平衡；

所述目的序列的5’端和3’端分别含有能够产生5’突出粘性末端和3’突出粘性末端的酶切位点，所述目的序列经酶切和末端修复后，其5’端和3’端的碱基相同；

所述目的序列包括经酶切后末端分别为A、T、G和C碱基突出的4种目的序列；

所述模拟DNA模板的构建方法包括如下步骤：

（1）分别扩增所述目的序列和所述侧翼序列；

（2）将所述目的序列的扩增产物与所述侧翼序列的扩增产物拼接；

（3）利用所述目的序列含有的酶切位点对应的酶对步骤（2）的拼接产物进行酶切，切除侧翼序列，分别得到末端分别为A、T、G和C碱基突出的4种DNA片段，将4种DNA片段等比例混合，得到所述模拟DNA模板；

所述目的序列的5’端和3’端包含的酶切位点分别如下：BamHI/PstI、NheI/KpnI、SalI/NsiI和EcoRI/EcoRI。

2.权利要求1所述的检测方法的如下任一种应用：

（1）在高通量测序文库构建的DNA转化效率检测中的应用；

（2）在用于筛选构建高通量测序文库的试剂盒中的应用；

（3）在优化高通量测序文库构建方法中的应用。