[发明专利]一种针对土壤样品的宏转录组样品提取方法在审
申请号: | 201911378660.2 | 申请日: | 2019-12-27 |
公开(公告)号: | CN110964720A | 公开(公告)日: | 2020-04-07 |
发明(设计)人: | 黄小毛;孙子奎 | 申请(专利权)人: | 上海派森诺生物科技股份有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 上海天翔知识产权代理有限公司 31224 | 代理人: | 吕伴 |
地址: | 200030 上海市*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 针对 土壤 样品 转录 提取 方法 | ||
1.一种针对土壤样品的宏转录组样品提取方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一:在2g样品当中加入2.5ml缓冲液、0.25mlSR1溶液、0.8mlSR2溶液以及0.19-0.21g PVPP干粉后涡旋混匀;
步骤二:加入3.5ml细胞裂解液后涡旋至分离层消失;
步骤三:以3100-3300rpm的转速涡旋震荡10-20min,后在室温条件下以2400-2600g的速度离心9-11min后转移第一次上层产物;
步骤四:加入1.5mlSR3溶液到所述第一次上层产物当中,涡旋混匀后4℃孵育8-12分钟,以去除蛋白质和细胞碎片后进一步在室温下以2400-2600g的速度离心9-11min后转移第二次上层产物;
步骤五:加入5mlSR4溶液到所述第二次上层产物当中,混匀后,孵育25-35分钟后以2400-2600g的速度离心9-11min后收集核酸沉淀;
步骤六:加入1mlSR5溶液到核酸沉淀的收集管中对核酸沉淀物进行重悬得RNA提取物;
步骤七:将所述RNA提取物进行洗脱和若干次重悬后得RNA沉淀。
2.如权利要求1所述的一种针对土壤样品的宏转录组样品提取方法,其特征在于,所述细胞裂解液为酚、氯仿、异戊醇的混合溶液,所述混合溶液的pH范围为6.5-8.0。
3.如权利要求1所述的一种针对土壤样品的宏转录组样品提取方法,其特征在于,所述SR4溶液为100%异丙醇。
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