[发明专利]一种猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清及其制备方法

说明书

本发明涉及血清的制备方法，具体涉及一种猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清及其制备方法。所述制备方法以豚鼠或兔作为免疫动物，采用传代细胞的病毒液作为猪乙型脑炎病毒抗原进行基础免疫。所制得的乙型脑炎特异性阳性血清效价高达1：2000倍以上，比直接免疫猪所得血清效价高，可满足乙型脑炎诊断技术和疫苗质量控制的要求。同时，免疫动物为兔和豚鼠，降低了成本，减少了用猪制备阳性血清因同源动物而引起的同源其他外源病毒污染的风险。

技术领域

本发明涉及血清的制备方法，具体涉及一种猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清及其制备方法。

背景技术

猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitis virus,JEV)引起的一种经蚊虫传播的人畜共患病，是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。猪是乙脑病毒的重要储存宿主和扩增宿主，是乙型脑炎的主要传染源，是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一。在乙型脑炎流行季节前，对猪进行预防接种，可有效降低人乙型脑炎发病率。目前，仍没有特效药物治疗乙型脑炎感染，主要通过预防接种措施来防制。

已发文章和专利文献上发表的猪乙型脑炎病毒阳性血清的制备是免疫猪或SPF鸡，免疫原是原代细胞培养的毒液，尚未有使用豚鼠或兔为免疫动物，传代细胞培养的毒液为免疫原制备阳性血清的报道。然而，采用现有技术中的方法制得的血清一般效价较低，而且在用猪制备阳性血清时，还可能会因为属于同源动物而引起同源其他外源病毒的污染。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了提升猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清的效价，满足乙型脑炎诊断技术和疫苗质量控制的要求，本发明提供了一种猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清及其制备方法。

(二)技术方案

本发明首先提供了一种猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清的制备方法，以豚鼠或兔作为免疫动物，在进行基础免疫时，采用传代细胞的病毒液作为猪乙型脑炎病毒抗原。

本发明发现，在按上述方案改变免疫动物和免疫原后，可以改善免疫效果，较大地提升阳性血清的效价。

优选地，依次采用所述猪乙型脑炎病毒抗原和猪乙型脑炎病毒活疫苗对所述免疫动物进行基础免疫，其中，所述猪乙型脑炎病毒活疫苗中含有所述猪乙型脑炎病毒抗原和佐剂；更优选所述猪乙型脑炎病毒抗原的效价≥10^7.0PFU/ml。

进一步优选地，所述基础免疫的免疫次数为2次，间隔时间为7～10天。优选在进行第1次基础免疫时，接种猪乙型脑炎病毒抗原；在进行第2次基础免疫时，接种所述猪乙型脑炎病毒活疫苗。通过这种方式，可以降低免疫动物的副反应，使得免疫原性更持久，血清效价进一步得到提高。

作为优选，所述免疫动物为体重350～450g的豚鼠或体重2000～3000g的兔。

在所述基础免疫中，所述猪乙型脑炎病毒抗原的具体制备过程如下：将乙型脑炎病毒接种在传代细胞中后，培养至50～75％细胞出现病变时收获病毒液；

优选所述传代细胞为Vero细胞。

按照本领域常识，应当在细胞状态较好的时候接种病毒，优选在接种时，所述Vero细胞呈致密单层的生长状态。而细胞的培养条件一般为37℃、5％CO₂。

在所述基础免疫之后，还包括加强免疫，作为优选方案，所述加强免疫具体包括：

采用猪乙型脑炎病毒灭活疫苗对所述免疫动物进行加强免疫；

优选所述猪乙型脑炎病毒灭活疫苗的制备方法如下：将猪乙型脑炎病毒液灭活后，与佐剂混合制得；其中，所述乙型脑炎病毒液优选为乙型脑炎P3株的病毒液；