[发明专利]一种猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清及其制备方法

权利要求书

1.一种猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清的制备方法，其特征在于，以豚鼠或兔作为免疫动物进行制备；

在以豚鼠为免疫动物时，免疫接种具体包括：

(1)基础免疫：分别对每只豚鼠腿部肌肉分点注射2ml的猪乙型脑炎病毒抗原，间隔7～10天后，分别对每只豚鼠腿部肌肉注射2ml猪乙型脑炎病毒活疫苗；

(2)加强免疫：在进行所述基础免疫后，每隔7～10天分别对每只豚鼠腹腔注射1ml猪乙型脑炎病毒灭活疫苗，共进行3～4次；

在以兔为免疫动物时，免疫接种具体包括：

(1)基础免疫：分别对每只兔皮下或肌肉注射2ml的猪乙型脑炎病毒抗原，间隔7～10天，分别对每只兔皮下或肌肉注射2ml猪乙型脑炎病毒活疫苗；

(2)加强免疫：在进行所述基础免疫后，每隔7～10天分别对每只兔皮下或肌肉注射1ml猪乙型脑炎病毒灭活疫苗，共进行3～4次，最后一次免疫接种时，分别对每只兔耳源静脉注射1ml所述猪乙型脑炎病毒灭活疫苗；

其中，所述猪乙型脑炎病毒抗原为传代细胞的病毒液，其具体制备过程如下：将乙型脑炎SA14-14-2株接种在Vero细胞中后，培养至50～75％细胞出现病变时收获病毒液，所述猪乙型脑炎病毒抗原的效价≥10^7.0PFU/ml；

所述猪乙型脑炎病毒活疫苗中含有所述猪乙型脑炎病毒抗原和佐剂；

所述猪乙型脑炎病毒灭活疫苗的制备方法如下：将乙型脑炎P3株的病毒液灭活后，与佐剂混合制得，在灭活前，所述乙型脑炎P3株的病毒液的效价LD₅₀≥10^-6.52/0.03ml。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述免疫动物为体重350～450g的豚鼠或体重2000～3000g的兔。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述灭活的具体过程如下：将β-丙内酯与所述乙型脑炎P3株的病毒液按重量比1：(3800～4200)于4℃搅拌灭活22～26小时，再于37℃水浴条件下水解1.5～2.5小时，制得乙型脑炎病毒P3株灭活抗原。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述佐剂含有如下重量份组分：

注射用水溶液 90～95份；

聚合物组合：

壳聚糖 1.5～2.5份；

聚乙二醇交酯酸共聚物 1.5～2.5份；

聚乙二醇600 0.8～1.2份；

乳化剂：

烷基糖苷 0.8～1.2份；

助剂：

月桂醇 0.8～1.2份。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述猪乙型脑炎病毒灭活疫苗的制备过程包括：在1800～2200转/分钟的搅拌速度下，将所述乙型脑炎病毒P3株灭活抗原缓慢加入灭菌后的所述佐剂中进行乳化。

6.一种猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清，其特征在于，采用权利要求1～5中任一项所述的制备方法制得。

7.根据权利要求6所述的猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清，其特征在于，所述猪乙型脑炎病毒特异性阳性血清的效价在1：2000以上。