[发明专利]采用轻链select联合层析色谱纯化双特异性抗体的方法

说明书

本发明公开一种采用轻链select联合层析色谱纯化双特异性抗体的方法，包括：将待纯化双特异性抗体样品依次经过层析柱1和层析柱2进行平衡、上样、清洗、洗脱等步骤完成分离纯化；所述层析柱1的层析填料选自Capto L，Protein L，Kappaselect中的至少一种；所述层析柱2的层析填料选自LambdaFabselect。本发明的方法，可以直接运用表达上清进行纯化，无需先经过Protein A；只需要两步亲和层析，操作简单，特异性强，载量高，能有效缩短纯化时间；相对于SEC、离子交换和疏水层析，轻链select亲和纯化更能达到高纯度的要求。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及双特异性抗体的分离纯化技术。

背景技术

双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁应，激发具有导向性的免疫反应，是基因工程抗体的一种，现已成为抗体工程领域的热点，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。

目前已知的双特异性抗体具有各种各样的Format结构形式，但大多都是具有Fc段结构，因而可以使用Protein A亲和层析或者Protein A联合SEC或离子交换或疏水层析进行分离纯化，但对于具有共同的IgG重链和两条不同的轻链的双特异性抗体，即Kappa/Lambda一体的双特异性抗体，在表达过程中可以出现多种形式错配或掉链的情形，此时再运用上述方法，一般需要多种方法联用，条件摸索比较困难，费时费力，而很难达到高效率的分离效果。

因此寻求一种适合的分离纯化方法应用于双特异性抗体特别是Kappa/Lambda一体的双特异性抗体的分离与提纯具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种纯化双特异性抗体的方法，能够高效率的分离双特异性抗体，条件摸索简单，分离效果好，产品纯度高，并可用于工艺放大。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

一种采用轻链select联合层析色谱纯化双特异性抗体的方法，包括：将待纯化双特异性抗体样品依次经过层析柱1和层析柱2进行分离纯化；

所述层析柱1的工艺步骤包括：

1a、用平衡缓冲液平衡层析柱，所述平衡缓冲液为pH 7.4的PBS溶液；

1b、将待纯化双特异性抗体样品上样至层析柱1，所述层析柱1的层析填料选自Capto L，Protein L，Kappaselect中的至少一种；

1c、用清洗缓冲液进行清洗，所述清洗缓冲液为pH 7.4的PBS溶液；

1d、用洗脱缓冲液进行洗脱，所述洗脱缓冲液为初始pH 3.0～3.5的0.05～0.2M甘氨酸溶液，且pH值以0.5pH单位逐渐递减进行梯度洗脱，至少递减一次；收集洗脱产品；

所述层析柱2的工艺步骤包括：

2a、用平衡缓冲液平衡层析柱，所述平衡缓冲液为pH 7.4的PBS溶液；

2b、将经所述层析柱1的洗脱产品上样至层析柱2，所述层析柱2的层析填料选自LambdaFabselect；

2c、用清洗缓冲液进行清洗，所述清洗缓冲液为pH 7.4的PBS溶液；

2d、用洗脱缓冲液进行洗脱，所述洗脱缓冲液为pH 3.0～3.5的0.05～0.2M甘氨酸溶液，且pH值以0.5pH单位逐渐递减进行梯度洗脱，至少递减一次；收集产物。

优选的，所述双特异性抗体为Kappa/Lambda一体的双特异性抗体。