[发明专利]采用轻链select联合层析色谱纯化双特异性抗体的方法

权利要求书

1.一种采用轻链select联合层析色谱纯化双特异性抗体的方法，其特征在于，包括：将待纯化双特异性抗体样品依次经过层析柱1和层析柱2进行分离纯化；

所述层析柱1的工艺步骤包括：

1a、用平衡缓冲液平衡层析柱，所述平衡缓冲液为pH 7.4的PBS溶液；

1b、将待纯化双特异性抗体样品上样至层析柱1，所述层析柱1的层析填料选自CaptoL，Protein L，Kappaselect中的至少一种；

1c、用清洗缓冲液进行清洗，所述清洗缓冲液为pH 7.4的PBS溶液；

1d、用洗脱缓冲液进行洗脱，所述洗脱缓冲液为初始pH 3.0～3.5的0.05～0.2M甘氨酸溶液，且pH值以0.5pH单位逐渐递减进行梯度洗脱，至少递减一次；收集洗脱产品；

所述层析柱2的工艺步骤包括：

2a、用平衡缓冲液平衡层析柱，所述平衡缓冲液为pH 7.4的PBS溶液；

2b、将经所述层析柱1的洗脱产品上样至层析柱2，所述层析柱2的层析填料选自LambdaFabselect；

2c、用清洗缓冲液进行清洗，所述清洗缓冲液为pH 7.4的PBS溶液；

2d、用洗脱缓冲液进行洗脱，所述洗脱缓冲液为pH 3.0～3.5的0.05～0.2M甘氨酸溶液，且pH值以0.5pH单位逐渐递减进行梯度洗脱，至少递减一次；收集产物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述双特异性抗体为Kappa/Lambda一体的双特异性抗体。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1a或步骤2a中，平衡缓冲液的用量为5～20倍柱体积；优选的，平衡缓冲液的用量为5～15倍柱体积；更优选的，平衡缓冲液的用量为10倍柱体积。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1c或步骤2c中，清洗缓冲液的用量为5～20倍柱体积；优选的，清洗缓冲液的用量为5～15倍柱体积；更优选的，清洗缓冲液的用量为10倍柱体积。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1d或步骤2d中，甘氨酸溶液浓度为0.08～0.15M；优选的，所述甘氨酸溶液浓度为0.08M，0.09M，0.10M，0.11M，0.12M，0.13M，0.14M，或0.15M。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1d或步骤2d中，洗脱缓冲液的用量为5～30倍柱体积；优选的，洗脱缓冲液的用量为10～20倍柱体积；更优选的，洗脱缓冲液的用量为10倍柱体积。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述层析柱1或层析柱2的工艺步骤还包括步骤：在洗脱步骤之后，用CIP缓冲液进行就地清洗；优选的，所述CIP缓冲液为pH 1.8的含0.12M磷酸和0.167M乙酸的溶液。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述层析柱1或层析柱2的工艺步骤还包括步骤：在CIP清洗步骤之后，用再生液进行清洗；优选的，所述再生液为0.015M NaOH溶液。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述再生液的用量为3～10倍柱体积。优选的，所述再生液的用量为5倍柱体积。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述层析柱1或层析柱2的工艺步骤还包括：在再生步骤之后，用储存液储存层析柱；优选的，所述储存液为体积分数10％～50％乙醇水溶液；优选的，所述储存液为体积分数15％～30％乙醇水溶液；更优选的，所述储存液为体积分数20％乙醇水溶液。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述储存液的用量为1～5倍柱体积；优选的，所述储存液的用量为2倍柱体积。