[发明专利]一种CHAPSO的制备方法

说明书

本发明属于生化检测底物领域，涉及一种CHAPSO的制备方法，步骤在于：将牛羊胆酸溶于乙腈，滴加氯甲酸乙酯反应2～3小时，得到溶液；溶液加入3‑二甲氨基丙胺，反应10～12小时，过滤，滤液减压浓缩为白色固体；将白色固体重结晶，得到3‑二甲氨基‑胆酰丙胺；将3‑二甲氨基‑胆酰丙胺溶于乙醇水溶液，加热至32℃，缓慢滴加3‑氯‑2‑羟基丙硫酸钠盐的水溶液，反应8～10小时，滤液减压浓缩得淡黄色粘稠物；将淡黄色粘稠物拌硅胶过柱，用甲醇：二氯甲烷梯度洗脱，收集纯品；将纯品真空干燥得到CHAPSO。本发明所用的原料成本普遍较低，也没有毒副作用比较大的易挥发成分，收率能够达到60％以上，放大生产比较方便。

技术领域

本发明涉及生化检测底物领域，特别涉及一种CHAPSO的制备方法。

背景技术

膜蛋白是一类具有非常重要功能的蛋白。膜蛋白具有一个定位在细胞 膜上的疏水区域，膜蛋白在没有去污剂存在的情况下是不溶于水的，所以 在对膜蛋白进行体外研究时，我们经常需要选用一定的去污剂来溶解膜蛋 白。因此去垢剂在膜蛋白的提取、纯化和操作中起了重要作用。而近年 来，膜蛋白研究取得了明显的进展，离不开研究去垢剂的进步。

去垢剂属于表面活性剂，应用广泛。去垢剂的功能与其结构有关，去 垢剂分子的极性亲水部分被作为亲水头部基团，而非极性疏水部分被作为 尾巴。也有一些去垢剂是豆状分子形状，它们有极性和非极性的面。两性 离子去垢剂头部基团是亲水性，含有正负电荷各一个，因此呈现电中性。 它们一般是比非离子型更强烈的表面活性剂。例如CHAPSO(3-[(3- Cholamid opropyl)dimethylammonio]-2-hydroxy-1-propanesulfonate， 3-[(3-胆胺丙基)二甲基氨基]-2-羟基-1-丙磺酸内盐)，其结构式如下：

CHAPSO是一种非变性的去垢剂、蛋白质裂解液，用于增溶膜蛋白和裂 解蛋白和蛋白之间的相互作用。常用于双向电泳等实验。其原理：它们的 两亲性质使得它们可以和疏水的膜蛋白相互作用，从天然脂双层中提取并 溶解膜蛋白，保护蛋白质的天然状态。CHAPSO具有一个极性更强的头部基 团，可以使它的可溶性更高。因此，CHAPSO可以用于完整细胞膜蛋白的溶 解。

CHAPSO以其较好的结构特质和广泛的用途，具有很好的学术研究前景 和市场价值，目前无文献报道CHAPSO的制备方法，因此需要开发一种 CHAPSO的制备方法以满足学术研究和市场应用的需求。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种CHAPSO的制备方法，能够绿色环 保、低成本高收率的得到CHAPSO。

本发明通过如下技术方案实现上述目的：一种CHAPSO的制备方法， 包括如下步骤：

①将牛羊胆酸溶于乙腈，冷却至0℃，滴加氯甲酸乙酯，保持2℃反 应2～3小时，得到有白色固体析出的溶液；

②将步骤①得到的溶液冷却至0℃，加入3-二甲氨基丙胺，在32℃下 保温反应10～12小时，过滤，滤液减压浓缩为白色固体；

③将步骤②得到的白色固体重结晶，得到3-二甲氨基-胆酰丙胺；

④将3-二甲氨基-胆酰丙胺溶于乙醇水溶液，加热至32℃，缓慢滴加 3-氯-2-羟基丙硫酸钠盐的水溶液，加完后升温至40℃，保温反应8～10小 时，滤液减压浓缩脱干溶剂得淡黄色粘稠物；

⑤将淡黄色粘稠物拌硅胶过柱，用甲醇：二氯甲烷梯度洗脱，收集 1:10～1:5段的纯品；

⑥将纯品真空干燥得到CHAPSO。

具体的，所述步骤③重结晶以乙腈作为溶剂。

具体的，所述步骤④中的乙醇水溶液为乙醇与水的4:1体积比的混合 液。