[发明专利]蛋白质异质缠结基元的设计与复杂索烃结构的制备方法

权利要求书

1.一种蛋白质异质缠结基元，是对肿瘤抑制因子p53的蛋白质缠结基元进行突变得到的异质二聚的缠结基元X⁺和/或X^-，其中X⁺是将p53缠结基元二聚界面的第5位和第7位氨基酸均突变为精氨酸得到的突变体，X^-是将p53缠结基元二聚界面的第5位和第7位氨基酸均突变为谷氨酸得到的突变体，所述缠结基元X⁺和X^-的氨基酸序列分别如序列表中SEQ IDNo：2和SEQ ID No：3所示。

2.一种复杂蛋白质索烃的生物合成方法，包括以下步骤：

1) 设计用于共表达形成复杂蛋白质索烃的两个前驱体序列：序列一为包含两个可相互反应的蛋白组分的蛋白质偶联反应对1和位于该两蛋白组分之间的一个异质缠结基元与目标蛋白1的融合片段，序列二为包含两个可相互反应的蛋白组分的蛋白质偶联反应对2和位于该两蛋白组分之间的另一个异质缠结基元与目标蛋白2的融合片段；其中，序列一与序列二中的异质缠结基元互补，是权利要求1所述的蛋白质异质缠结基元X⁺或X^-；所述蛋白质偶联反应对中的两蛋白组分能够发生偶联反应实现环化，而蛋白质偶联反应对1和蛋白质偶联反应对2之间为正交关系，即二者之间不会发生交叉反应；

2) 构建步骤1）所述两个前驱体序列对应的编码基因，并引入表达载体中；

3) 在细胞中共表达步骤2）构建的基因；

4) 对表达蛋白进行纯化，得到目标蛋白1和目标蛋白2共同形成的异质索烃和/或高阶索烃结构。

3.如权利要求2所述的生物合成方法，其特征在于，所述蛋白质偶联反应对是分离型内含肽或是谍标签和谍捕手组成的蛋白质偶联反应对。

4.如权利要求3所述的生物合成方法，其特征在于，所述蛋白质偶联反应对由分离型内含肽Npu1的C端部分NpuC1和N端部分NpuN1组成，或者由分离型内含肽Npu2的C端部分NpuC2和N端部分NpuN2组成；NpuN1、NpuC1、NpuN2、NpuC2的氨基酸序列分别如序列表中SEQ IDNo：4、SEQ ID No：5、SEQ ID No：6、SEQ ID No：7所示。

5.如权利要求3所述的生物合成方法，其特征在于，所述谍标签是谍标签A，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID No：8所示；所述谍捕手是谍捕手B，其氨基酸序列如序列表中SEQ IDNo：9所示。

6.如权利要求2所述的生物合成方法，其特征在于，在步骤1）设计的前驱体序列中，2个、3个或更多个异质缠结基元X^-与目标蛋白的融合片段串联在一个，最终获得蛋白质高阶索烃。

7.如权利要求2所述的生物合成方法，其特征在于，步骤1）在前驱体序列中设计His标签序列，步骤4）通过镍亲和层析法纯化蛋白质。

8.如权利要求2所述的生物合成方法，其特征在于，步骤2）中将两个前驱体序列对应的编码基因构建在同一个表达载体上或者两个不同的表达载体上；步骤3）利用原核表达系统或真核表达系统共表达所构建的两个融合蛋白。

9.一种人工抗体，是通过权利要求6所述的复杂蛋白质索烃的生物合成方法获得的高阶索烃，是2个或更多个含有抗体或抗体类似物分子的融合蛋白与另一个融合蛋白分子缠结而成的高阶索烃。