[发明专利]一种注射剂用透明质酸的制备方法

说明书

本发明提供了一种注射剂用透明质酸或其盐的制备方法，包括以下步骤：向终点发酵液中加入乙醇得HA粗品沉淀；再溶解，较低浓度下过滤，向滤液中加入乙醇，得到精制HA沉淀。将沉淀再次溶解，较低浓度下调pH调至6.0‑7.0，过极性吸附树脂柱，再将流出液pH调至5.0‑6.0，过非极性吸附树脂柱，然后过0.2μm滤芯，再加入乙醇进行沉淀，然后脱水、干燥，得注射剂用HA。本发明的方法采用低浓度、多次精制的方法，并结合树脂串联技术有效降低了注射剂用HA产品的杂质，尤其是内毒素降低至当前标准的1/20‑1/10，提高了注射剂用HA的安全性。本发明的方法广泛适用于大生产使用。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种制备医用透明质酸的方法，具体涉及一种特定pH下树脂串联技术制备注射剂用透明质酸的纯化工艺。

背景技术

透明质酸(hyaluronic acid)又名玻璃酸，简称HA，化妆品及食品领域称其透明质酸，在医药领域应用称为玻璃酸或玻尿酸，常用形式为钠盐，故称透明质酸钠或玻璃酸钠，HA具有润滑、保湿、黏弹性、修复组织创伤、提高机体免疫力和药物靶向载体等生物活性不断被开发和利用，可用于美容填充、关节注射液、眼科手术粘弹剂，外科手术防粘连、止血等功效，在医药领域展现出广阔的应用前景。

未精制透明质酸含有内毒素，目前，欧洲药典注射剂用HA的内毒素标准≤0.05EU/mg，国内注射剂用HA的内毒素标准≤0.03EU/mg。内毒素是引起患者不明原因发热的重要原因之一，因此注射剂或其他体内医用材料的内毒素不仅要符合标准，还要越低越好，以最大程度上减少临床不良反应的发生，这对相应的原料药的纯度提出了更高的要求。

目前，透明质酸的提纯大多采用活性炭吸附和树脂吸附两种方式。

树脂有三种类型：离子交换树脂、大孔吸附树脂和螯合树脂，不同类型的树脂原理不同：离子交换树脂中树脂表面结合有阳离子或阴离子，当物质通过树脂时，会有离子交换发生，可用于不同离子形式的转型，如将钠型转为H⁺型或其他离子型。大孔吸附树脂具有多孔性、高比表面积的特点，不含离子交换基团。对HA中的杂质微粒具有吸附作用，而对HA的吸附力弱。因此适合用于HA纯化工艺。如，CN 102030837 A一种纯化浓缩透明质酸钠发酵液方法，公开了一种将透明质酸钠发酵液先经过树脂吸附和空气搅拌去除杂质纯化方法，虽然蛋白质含量较低、但内毒素含量仍然偏高。

CN 1675352 A生产透明质酸的微生物及透明质酸的纯化方法，公开了一种纯化透明质酸的方法，使用芳族吸附树脂和活性炭纯化透明质酸的方法。然而，活性炭吸附工艺最大的缺点是活性炭粉末中有少量细小颗粒，不容易被过滤介质拦截，即使0.2μm的滤膜都不能完全截留，造成少量细小活性炭粒子随滤液进入产品，用乙醇沉淀时残留在HA产品中，引入了新的杂质。

由此可见，需要开发一种能够有效降低透明质酸类产品中内毒素含量、提高纯度的方法，以进一步提高注射剂用透明质酸类产品的安全性。

发明内容

为进一步降低透明酸质类产品中内毒素含量，本发明提供一种降低处理料液浓度、多次精制并结合特定pH下树脂串联技术纯化透明质酸的方法，制备的产品中内毒素含量为国际标准的1/20至1/10，大大提高了注射剂用HA原料的安全性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种注射剂用透明质酸的制备方法，包括以下步骤：

（1）向HA终点发酵液中加入乙醇进行沉淀，静置分层，沉淀即为HA粗品；

（2）将HA粗品用水溶解，然后过滤，收集滤液，再用乙醇沉淀，将沉淀脱水、干燥，得精制HA；

（3）精制HA用水溶解，并将pH调至6.0-7.0，过极性大孔吸附树脂柱，获得流出液1；

（4）将流出液1的pH调至5.0-6.0，过非极性大孔吸附树脂柱，获得流出液2；