[发明专利]一种基于酿酒酵母的双链RNA合成优化与应用

说明书

本发明提供了一种基于酿酒酵母的双链RNA合成优化与应用。具体地，提供了一种核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物的结构(5’‑3’)如式I所示：Z1‑Z2‑Z3‑L1‑Z4‑Z5式I；其中，各“‑”独立地为键或核苷酸连接序列；Z1为无或酶切位点；Z2为TDH3启动子；Z3为正向的ofslc35b1基因的核酸序列；L1为无或核苷酸连接序列；Z4为反向的ofslc35b1基因的核酸序列；和Z5为无或酶切位点。本发明还提供了含有此核酸构建物的载体、宿主细胞，及利用此方法产生玉米螟虫致死基因dsRNA的方法。相对于现有技术，本发明显著提高了玉米螟虫致死基因dsRNA的生产效率，并促进了生物农药的广泛应用。

技术领域

本发明涉及转基因应用领域，具体地，涉及一种基于酿酒酵母的双链RNA合成优化与应用。

背景技术

生物农药是一种利用活性生物体或是代谢产物，有针对性地在农业生产中应用，以此来实现病虫害防治目的。生物农药以其自身独特的优势，被广泛应用在农业病虫害防治中，相较于以往的高毒副农药而言，病虫害防治效果更为突出，还能够有效降低对生态环境的污染。针对我国种植业而言，开发生物农药具有极大的商业价值和市场前景。

RNA干扰(RNA interferencre，RNA干扰)可以作为一种最具潜力的害虫防治新技术、新策略加入到害虫综合防治策略中，从而减少化学农药带来的环境压力，改善传统农药作用靶标单一，污染严重，害虫抗药性增长快的现状。目前通过喂食或注射dsRNA，已经发现在多种昆虫中发现了RNA干扰效应，包括蜚蠊目，双翅目，半翅目等。

因此，本领域急需一种高效且稳定发挥昆虫RNA干扰作用的生产方案。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效且稳定发挥昆虫RNA干扰作用的生产方案。

本发明的第一方面，提供了一种核酸构建物，所述核酸构建物的结构(5'-3')如式I所示：

Z1-Z2-Z3-L1-Z4-Z5 式I

其中，

Z1为无或酶切位点；

Z2为TDH3启动子；

Z3为正向的、编码dsRNA分子的核酸序列；

L1为无或核苷酸连接序列；

Z4为反向的、用于编码所述dsRNA分子的核酸序列，其中，Z3和Z4是互补形成所述的dsRNA；和

Z5为无或酶切位点，

各“-”独立地为键或核苷酸连接序列。

在另一优选例中，所述的编码dsRNA分子的核酸序列为ofslc35b1基因。

在另一优选例中，所述的ofslc35b1基因的核酸序列选自下组：

(a)所述核酸序列如SEQ ID NO.:1所示；

(b)所述核酸序列与SEQ ID NO.:1所示的核苷酸序列有≥95％相同性，优选地≥98％，更优选地≥99％；和

(c)与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述表达ofslc35b1基因的核酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在另一优选例中，所述的TDH3启动子选自与SEQ ID NO:2有至少95％同源性的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述的TDH3启动子的序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明的第二方面，提供了一种载体，所述载体含有如第一方面所述的核酸构建物。