[发明专利]一种改良Trizol法提取胚乳RNA方法

权利要求书

1.一种改良Trizol法提取胚乳RNA方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：将冷冻后的样品在液氮中研磨后称重，称取不超过0.1g粉末放入390-410ul的RNA缓冲液中放入离心管，剧烈震荡1-2min。

步骤二：在所述离心管中加入240-260ul提取溶液，混匀后在3-5℃的温度下以12000-14000r/min的转速离心13-16min；

步骤三：将步骤二离心后的上清液转移至另一离心管中，加入0.9-1.1ml TRIZzol，室温放置5-7min；

加入190-210ul氯仿后剧烈震荡混匀，室温放置2-3min混匀后在3-5℃的温度下以12000-14000r/min的转速离心13-16min；

步骤四：将步骤四离心后的上清液转移至另一离心管中，加入0.4-0.65ml的异丙醇以及38-42ul的浓度为5M的NaCl溶液，混匀斡旋后室温放置8-12min，在3-5℃的温度下以11000-13000×g的速度离心至离心管底部有白色沉淀；

步骤五：将所述步骤四的离心管中的上清液去除后，加入0.9-1.1ml的75％无水乙醇，室温放置1-2min后在3-5℃的温度下以7000-8000×g的速度离心6-8min后重复所述步骤五至少一次；

步骤六：将所述步骤五的液体中的上清液去除后进行若干离心去除上清液操作后室温干燥至所述白色沉淀变透明；

步骤八：在所述透明沉淀中加入DEPC水后在56-58℃恒温金属浴中充分溶解5-10min后取样检测。

2.如权利要求1所述的一种改良Trizol法提取胚乳RNA方法，其特征在于，所述步骤一的冷冻为采用-80℃冰箱冷冻。

3.如权利要求1所述的一种改良Trizol法提取胚乳RNA方法，其特征在于，所述步骤一的RNA缓冲液由如下方法制备而得：

吸取10ml浓度为0.5M的EDTA和pH值为8.0的10ml 1M TRIS溶液到烧杯中，加入40mlDEPC灭菌水，称取6.36g氯化锂和1.5g SDS至烧杯中，搅拌溶解后，定容到100ml，121℃，20min下高压灭菌；

待灭菌后，加入1.5ml巯基乙醇，混匀得所述RNA缓冲液。

4.如权利要求1所述的一种改良Trizol法提取胚乳RNA方法，其特征在于，所述步骤二中的提取溶液为酚：氯仿：异戊醇以25：24:1的质量份比例混合而得。

5.如权利要求1所述的一种改良Trizol法提取胚乳RNA方法，其特征在于，所述步骤四当中的异丙醇为纯度为100％的异丙醇；所述NaCl溶液为采用DEPC水配制的NaCl溶液。

6.如权利要求1所述的一种改良Trizol法提取胚乳RNA方法，其特征在于，所述步骤六当中的室温干燥时间不超过5min。