[发明专利]呼吸道合胞病毒F基因的检测引物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种呼吸道合胞病毒F基因的检测引物、试剂盒及方法，利用数字PCR技术平台检测呼吸道合胞病毒，整个检测流程从采样到报告结果仅需数个小时，极大程度保证了检测的时效性，并且通过数字PCR技术平台大大提升了检测的灵敏度，将检测限降低至单个拷贝病原体。所用样品为肺泡灌洗液、血浆或咽拭子，减轻患者采样时的不适，同时更利于新生儿肺炎患者采样检测。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种呼吸道合胞病毒F基因的检测引物、试剂盒及方法。

背景技术

根据世界卫生组织发布的统计数据，在2000年到2016年的17年间，下呼吸道感染始终是最为致命的传染病。仅在2016年一年时间死于下呼吸道感染的人数就高达300万，其中小于15周岁的儿童和大于60周岁以上的老人占据了绝大多数。

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus，HRSV)是一种属于副粘病毒科、肺炎病毒属的单负链RNA病毒，也是引起小儿肺炎的最常见的病原体。其致病原因往往是由于新生儿自身免疫功能尚未发育成熟，而来自于母体的抗体并不能完全预防人呼吸道合胞病毒感染。该病呈现季节流行性，常于春、冬季节好发，经由飞沫及密切接触传播，传播范围广。根据相关文献报道，几乎所有2岁以上的儿童，在出生后都经历过1次甚至多次感染。人呼吸道合胞病毒感染后通常有3-7日的潜伏期，随后可有发热、鼻炎、咽炎等呼吸道症状，常发展为急性或致死性的下呼吸道感染，病理表现常为间质性肺炎或毛细支气管炎。

目前为止针对人呼吸道合胞病毒的特异性疫苗仍未问世，因此人呼吸道合胞病毒感染仍然是亟待解决的全球性健康问题，2016年世界卫生组织也在全球流感监测、响应系统的基础上，建立了全球呼吸道合胞病毒监测系统。

目前针对呼吸道合胞病毒感染的诊断，往往是在发热、咳嗽、鼻塞、鼻漏、咽喉痛和呼吸困难等临床症状的基础上结合流行病学资料进行经验性诊断，但是这种诊断方法难以将其与其它病原体引起的呼吸道感染进行区分。而呼吸道感染的病原学十分复杂，包含了细菌、病毒、真菌、支原体、衣原体等，其中仅呼吸道相关病毒就涉及不少于8个科目、200余种病毒。不同的病原体导致的呼吸道感染其预后、治疗往往具有很大差异，而明确病原体类型常需使用病毒分离培养、病毒抗原抗体血清学检测以及病毒核酸的分子生物学检测等方法。

其中病毒分离培养是病原学诊断的金标准，但是其样品采集运输条件苛刻、培养操作难度大、培养周期长、检出率低等缺陷限制了该方法在临床上的广泛应用。

病原体血清学检测，利用抗原抗体结合等原理，通过检测患者血清中抗病原体的抗体，或者病原体本身特异性表面抗原实现病原体的鉴定。目前常用的方法为直接免疫荧光检测与快速抗原检测，但是也存在检出率低、操作复杂等缺点，其中直接免疫荧光检测还需要特殊的免疫荧光显微镜，进一步限制了该方法的推广。

实时荧光定量PCR的方法具有较好的特异性与灵敏度，但是受限于实时荧光定量PCR的检测原理，其检测限仍然难以达到单个拷贝，对于患病早期的检测效果欠佳。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种呼吸道合胞病毒F基因的检测引物、试剂盒及方法，利用数字PCR技术平台检测呼吸道合胞病毒F基因，整个检测流程从采样到报告结果仅需数个小时，极大程度保证了检测的时效性，并且通过数字PCR技术平台大大提升了检测的灵敏度，将检测限降低至单个拷贝病原体。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了呼吸道合胞病毒F基因的检测引物，包括上游引物RSV-F和下游引物RSV-R：

RSV-F：5′-CTATGACCCATTAGTATTCC-3′，

RSV-R：5′-CATGATATTTGTGGTGGA-3′。