[发明专利]呼吸道合胞病毒F基因的检测引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.呼吸道合胞病毒F基因的检测引物，包括上游引物RSV-F和下游引物RSV-R：

RSV-F：5′-CTATGACCCATTAGTATTCC-3′，

RSV-R：5′-CATGATATTTGTGGTGGA-3′。

2.根据权利要求1所述的呼吸道合胞病毒F基因的检测引物，其特征在于，还包括探针：5′-发光基团-CGAGAAGATTAACCAGAGCCTAGC-淬灭基团-3′，所述发光基团包括：FAM，HEX，VIC，ROX，TAMARA，Cy3或Cy5，所述淬灭基团包括MGB、BHQ1、BHQ2、BHQ3。

3.呼吸道合胞病毒F基因的检测试剂盒，包括权利要求1或2所述的检测引物。

4.根据权利要求3所述的呼吸道合胞病毒F基因的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括：PCR反应液、水、阴性参照物、阳性参照物、定量标准品以及液滴生成液。

5.根据权利要求4所述的呼吸道合胞病毒F基因的检测试剂盒，其特征在于，所述阴性参照物由人类细胞系K-562基因组DNA制成，所述阳性参照物由包含呼吸道合胞病毒F基因片段的质粒制成，所述定量标准品由包含呼吸道合胞病毒F基因片段的质粒制成1copies/μL、100copies/μL、10000copies/μL。

6.根据权利要求4所述的呼吸道合胞病毒F基因的检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括PCR反应用缓冲液、0.2-0.3mM三磷酸碱基脱氧核苷酸混合液、0.2-0.3mM三磷酸碱基核苷酸混合液、4-6U耐热DNA聚合酶、4-6U逆转录酶、300-500nM上、下游引物和100-300nM探针。

7.根据权利要求6所述的呼吸道合胞病毒F基因的检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应用缓冲液包含20mM氯化钾、50mM的PH8.0 Tris-HCl、1.5mM二价镁离子。

8.呼吸道合胞病毒F基因的检测方法，包括：

1)获取待检测的核酸样本；

2)使待检测的核酸样本与PCR反应液混合，并使形成的混合液被液滴生成液包裹，形成包含单个核酸或者不包含核酸的PCR反应液滴；

3)对PCR反应液滴进行PCR扩增；

4)对扩增产物进行分析，根据生成液滴总个数、PCR反应体系体积进行校正，获得总的呼吸道合胞病毒拷贝数。

9.根据权利要求8所述的呼吸道合胞病毒F基因的检测方法，其特征在于，步骤3)中，扩增引物包括：

RSV-F：5′-CTATGACCCATTAGTATTCC-3′，

RSV-R：5′-CATGATATTTGTGGTGGA-3′；

探针包括：

5′-发光基团-CGAGAAGATTAACCAGAGCCTAGC-淬灭基团-3′，所述发光基团包括：FAM，HEX，VIC，ROX，TAMARA，Cy3或Cy5，所述淬灭基团包括MGB、BHQ1、BHQ2、BHQ3。

10.根据权利要求8所述的呼吸道合胞病毒F基因的检测方法，其特征在于，步骤3)中，PCR扩增条件为：