[发明专利]一株黑曲霉基因工程菌及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201911363784.3 | 申请日： | 2019-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN111088173B | 公开（公告）日： | 2021-08-20 |
| 发明（设计）人： | 余斌;刘庆国;陈勇;应汉杰;刘丽;赵南;柳东 | 申请（专利权）人： | 南京高新工大生物技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/80;C12P7/48;C12N11/00;C12R1/685 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 胡建华 |
| 地址： | 210032 江苏省南京市高新技术*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一株黑 曲霉 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.黑曲霉基因工程菌在发酵制备柠檬酸中的应用，其特征在于，以所述黑曲霉基因工程菌为发酵菌株，通过固定化发酵制备柠檬酸；所述黑曲霉基因工程菌中葡聚糖合成调控基因VosA失活，原始黑曲霉为Aspergillus Niger ATCC12846，所述葡聚糖合成调控基因VosA失活后的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述黑曲霉基因工程菌的构建方法包括如下步骤：
(1)提取原始黑曲霉的基因组DNA；
(2)以步骤(1)得到的基因组DNA为模板，扩增得到基因VosA的上游同源臂和下游同源臂；以质粒PAN7-1为模板，扩增得到潮霉素抗性基因；以基因VosA的上游同源臂、下游同源臂和潮霉素抗性基因为模板，通过重叠延伸PCR扩增得到基因敲除片段；
(3)将步骤(2)得到的基因敲除片段导入黑曲霉原生质体中进行同源重组，即得葡聚糖合成调控基因VosA失活的黑曲霉基因工程菌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述固定化发酵以多孔纤维材料作为固定化介质。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述固定化发酵的发酵培养基的配制步骤如下：称取玉米粉加水配制成浓度为200g/L-300g/L的玉米粉液；每1L发酵液加入0.5mL-1mL的液化酶，在60℃-75℃下保温35min-45min；再将玉米粉液加热至85℃-105℃，每1L发酵液加入0.5mL-1mL的液化酶，酶解45min-60min直至碘液不变蓝，过滤玉米粉液得玉米清液；向玉米清液中加入未过滤的玉米粉液，所述未过滤的玉米粉液和玉米清液的体积比为2-10:100，混匀得到固定化发酵培养基。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述固定化发酵的发酵条件如下：发酵温度为30℃-37℃，发酵时间为72h-115h，发酵转速为200rpm-330rpm。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述多孔纤维材料为改性多孔纤维材料，改性步骤如下：将多孔纤维材料用无水乙醇浸泡1h-1.5h，再用水冲洗，烘干至恒重，即得改性多孔纤维材料。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京高新工大生物技术研究院有限公司，未经南京高新工大生物技术研究院有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201911363784.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
