[发明专利]一种检测啤酒中呕吐毒素的方法

权利要求书

1.一种检测啤酒中呕吐毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、样品模版DNA制备：采用微生物DNA提取试剂盒，从小麦或麦芽样品中提取微生物总DNA，其中包含镰刀菌的产毒DNA；

S2、引物合成：从NCBI数据库检索到镰刀菌cDNA序列中控制DON合成的特异序列tri5，设计并合成PCR的引物；

S3、qPCR反应体系：将每个样品的模版DNA、引物和Taqman荧光探针加入Powermix反应体系溶液，进行PCR扩增，并对PCR反应程序进行优化，得到产毒镰刀菌DNA的单一扩增峰、峰型对称、标准DNA定量线性关系良好的qPCR程序；

S4、qPCR定量：PCR反应每经过一个循环，增加一个荧光信号，当荧光信号达到荧光阈值时所经历的循环次数CT值与起始模板的量呈线性关系，由于禾谷镰刀菌是最常见的DON产生菌，所以将从小麦样品中分离纯化得到的禾谷镰刀菌DNA作为标准品进行不同浓度的qPCR反应，制定与CT值之间的标准曲线，最后通过每个未知样品qPCR的CT值对其产DON镰刀菌DNA的浓度进行定量检测。