[发明专利]一种线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding的制备方法及其运用

说明书

本发明公开了一种线粒体基因治疗载体MI‑linker‑U‑binding的制备方法及其运用。本发明属于药物制剂技术领域。本发明通过线粒体靶向基团和氟化材料膜穿透能力进入线粒体基质，并响应于病变线粒体高ROS的水平释放功能基因和治疗药物Ide，达到对于线粒体基因突变相关疾病(如：LHON)标本兼治的目的；另外本发明避免了目前病毒载体介导的异位表达体系效率低、免疫原性高、价格昂贵等问题，该载体能够高效递送功能基因和药物进入线粒体基质，实现对LHON标本兼治的效果；该线粒体基因治疗载体也可用于其他线粒体基因突变所引起的疾病，如线粒体脑肌病伴乳酸酸中毒及卒中样发作综合征(MELAS)、肌阵挛性癫痫和不规整红纤维病(MERRF)等。

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种线粒体靶向药物和功能基因的共递送体系，达到对线粒体基因突变相关疾病标本兼治的目的。

背景技术

Leber遗传性视神经病变(Leber Hereditary Optic Neuropathy，LHON)是由线粒体DNA(mtDNA)突变引起的罕见病，也是目前世界上最常见的青壮年致盲性疾病之一。LHON多发于青壮年男性，平均发病年龄为24岁。一旦发病，患者的主要症状表现为数周内视力急性减退或丧失，且这种视力损伤难以恢复，这不仅给患者带来了巨大的痛苦，也给家庭和社会造成了非常沉重的负担。由于该疾病危害大，且目前还没有有效的治疗手段，因此，创新研发治疗LHON的药物，早期干预LHON疾病发展进程，为患者提供有效的治疗手段，具有重要的意义。

目前，艾地苯醌(Ide)是唯一一种上市用于治疗该疾病的药物，但是作为抗氧剂Ide仅能降低ROS水平缓解疾病病症，而无法从根本上消除线粒体基因突变所导致的问题。基因治疗可以通过操作遗传物质来干预疾病的发生发展过程，从而达到治疗该疾病的目的。但是，由于LHON是mtDNA突变所导致的，且普通的基因载体无法穿过线粒体双层膜结构，所以现在对于LHON的基因治疗主要是通过腺相关病毒等病毒载体异位表达来实现的，这类策略存在效率低下、免疫原性高、价格昂贵等问题。因此，为了提高基因转染效率、减少免疫反应，开发一种非病毒线粒体基因治疗载体用于LHON等线粒体基因突变相关疾病的治疗是至关重要的。

发明内容

为了解决上述问题；本发明提供一种线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding的制备方法，本发明中的线粒体基因治疗载体可用于治疗LHON以及其他线粒体基因突变相关疾病，达到标本兼治的目的。

本发明的技术方案是：一种线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding的制备方法：

所述线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding由M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding以50：1摩尔比混合形成；所述M-linker-U-binding与Ide-linker-U-binding的化学结构如下：

其中，m、n为正整数，

所述MI-linker-U-binding、M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding中M表示线粒体靶向基团，I和Ide表示药物艾地苯醌，linker表示活性氧响应键，U表示十一氟己胺，binding表示基因结合基团；M-linker-U-binding表示带有线粒体靶向基团的氟化活性氧响应载体，Ide-linker-U-binding表示带有艾地苯醌的氟化活性氧响应载体，MI-linker-U-binding表示同时带有线粒体靶向基团和艾地苯醌的氟化活性氧响应载体；

其具体包括以下步骤：