[发明专利]一种线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding的制备方法及其运用

权利要求书

1.一种线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding的制备方法：其特征在于：

所述线粒体基因治疗载体MI-linker-U-binding由M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding以50：1摩尔比混合形成；所述M-linker-U-binding与Ide-linker-U-binding的化学结构如下：

其中，m、n为正整数，

所述MI-linker-U-binding、M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding中M表示线粒体靶向基团，I和Ide表示药物艾地苯醌，linker表示活性氧响应键，U表示十一氟己胺，binding表示基因结合基团；M-linker-U-binding表示带有线粒体靶向基团的氟化活性氧响应载体，Ide-linker-U-binding表示带有艾地苯醌的氟化活性氧响应载体，MI-linker-U-binding表示同时带有线粒体靶向基团和艾地苯醌的氟化活性氧响应载体；

其具体包括以下步骤：

(1)、所述linker-U-binding的合成：将活性氧响应键、十一氟己胺和基因结合基团以1.2：0.2：0.8的摩尔比溶于无水二甲基亚砜中，在90℃油浴条件下反应48h得到双键末端的linker-U-binding；随后，取出二分之一体积的linker-U-binding搁置，在剩下二分之一体积的中linker-U-binding加入37μL封端分子，40℃反应24h，最后通过乙醚沉淀得到氨基末端的linker-U-binding；

(2)、M-linker-U-binding的合成：将活化后的线粒体靶向基团与氨基末端的linker-U-binding混合搅拌，在25℃-35℃的温度中反应24h，后得到M-linker-U-binding；

(3)、Ide-linker-U-binding的合成：在搁置的linker-U-binding中加入5倍摩尔量的艾地苯醌；在40℃条件下反应24h得到Ide-linker-U-binding；

(4)、MI-linker-U-binding的制备：将合成得到的M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding采用乙醚沉淀；祛除杂质收集得到固体的M-linker-U-binding和Ide-linker-U-binding，利用无水二甲基亚砜分别配制浓度为200mg/mL的母液，用pH＝4.5的碳酸氢钠缓冲溶液对母液进行稀释，将二者以50：1摩尔比混合，制备得到载体MI-linker-U-binding；

所述线粒体靶向基团选自三苯基膦；

所述基因结合基团选自组胺、胍丁胺和精氨酸中的一种或多种；

所述活性氧响应键选自缩硫酮、硫醚酯键和双硒键中的一种或多种。