[发明专利]一种生物组织细胞外基质材料的制备方法

说明书

本发明公开一种生物组织细胞外基质材料的制备方法，包括：原料的初处理：将动物的小肠滤干冷冻；原料的剔除处理：将小肠解冻，对其切割使得留下小肠粘膜下层组织；病毒灭活处理：将小肠粘膜下层组织放入搅拌容器中的灭活溶液中进行搅拌以进行病毒灭活；脱细胞处理：将灭活后的小肠粘膜下层组织固定在负导电电极片上，在电解液中用双电极系统加负电进行脱细胞；然后将脱细胞后的小肠粘膜下层组织进行清洗得到小肠粘膜下层细胞外基质材料。本发明所示制备方法简单，舍去了传统方法中用生物移酶脱细胞与多次清洗的步骤，尤其对原料冷冻处理，只需一步完成脱细胞的过程。过程简单且效果好。检验结果表明，细胞外基质的形貌保留完整且无细胞残留。

技术领域

本发明属于生物材料制备技术领域，尤其涉及一种生物组织细胞外基质材料的制备方法。

背景技术

细胞是一种非常脆弱的生物体，必须由细胞外基质为其支撑才能得以生存。因此，细胞外基质材料是组织工程中发挥着重要的作用。

细胞外基质的成分常常在物种间保留，并能被异种受体耐受，也就是说，动物源(猪，牛或羊)等的细胞外基质可以被人类接受。目前，从不同组织，包括皮肤，心脏瓣膜，血管，神经，肌腱，韧带，小肠粘膜下层，已经在组织工程和可再生性应用中得到广泛研究与应用。

然而，如何高效且安全得移除所有细胞和胞核物质，同时保存细胞外基质复杂的网状结构是一个技术难点。目前已有多种方式从动物源中获取脱细胞的细胞外基质的方法，但是步骤复杂，需经生物蛋白酶与多种化学物进行脱细胞与清洗。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种生物组织细胞外基质材料的制备方法，能够以简单的步骤制备细胞外基质，细胞外基质的形貌保留完整且无细胞残留。

本发明公开一种生物组织细胞外基质材料的制备方法，包括：

步骤(1)，原料的初处理，包括：将动物的小肠滤干进行冷冻；

步骤(2)，原料的剔除处理，包括：将小肠解冻，对其切割使得留下小肠粘膜下层组织；

步骤(3)，病毒灭活处理，包括：将小肠粘膜下层组织放入搅拌容器中的灭活溶液中进行搅拌以进行病毒灭活，灭活溶液为过氧化物与乙醇的混合液；

步骤(4)，脱细胞处理，包括：将灭活后的小肠粘膜下层组织固定在负导电电极片上，在电解液中用双电极系统加负电进行脱细胞；然后将脱细胞后的小肠粘膜下层组织进行清洗，得到小肠粘膜下层细胞外基质材料。

作为优选，步骤(5)，固定成型，包括：利用模具将一层或多层小肠粘膜下层细胞外基质材料平铺在模具上，用上下两个底板进行固定定型；步骤(6)，干燥处理，包括：将固定于两个底板之间的小肠粘膜下层细胞外基质材料放入灭菌的通风烘箱中烘干。

作为优选，在步骤(6)之后包括步骤(7)，灭菌解析，包括采用环氧乙烷进行灭菌；然后在解析室中进行解析。

作为优选，步骤(1)中，在—20℃到—80℃下冷冻。步骤(3)中，所述灭活溶液与小肠粘膜下层组织的体积比为20:1～30:1；和/或，所述过氧化物的浓度为0.1％～10％(v/v)，乙醇的浓度为0.1～8％(v/v)。

作为优选，步骤(3)中，对灭活后的小肠粘膜下层组织进行清洗，包括：先采用清洗液在超声波清洗机中进行，超声波的功率在3500W以下，所述清洗液为PH值为7.2-7.4的PBS溶液，PBS溶液温度为20-37℃，PBS溶液与小肠粘膜下层组织的体积比为20:1～50:1；然后将用PBS清洗后的小肠粘膜下层组织进行去离子水超声清洗，去离子水温度为20-37℃，去离子水与小肠粘膜下层组织的体积比为20:1～50:1。

作为优选，步骤(4)中，负电的范围为—0.5～—10V，加电时间为5～30分钟，电解液为PBS溶液；和/或用导电夹子将灭活后的小肠粘膜下层组织固定在负导电电极片上。