[发明专利]一种生物组织细胞外基质材料的制备方法

权利要求书

1.一种用于生物组织细胞外基质材料的制备方法，包括：

步骤(1)，原料的初处理，包括：将动物的小肠滤干进行冷冻；

步骤(2)，原料的剔除处理，包括：将小肠解冻，对其切割使得留下小肠粘膜下层组织；

步骤(3)，病毒灭活处理，包括：

将小肠粘膜下层组织放入搅拌容器中的灭活溶液中进行搅拌以进行病毒灭活，灭活溶液为过氧化物与乙醇的混合液；

步骤(4)，脱细胞处理，包括：

将灭活后的小肠粘膜下层组织固定在负导电电极片上，在电解液中用双电极系统加负电进行脱细胞；然后将脱细胞后的小肠粘膜下层组织进行清洗，得到小肠粘膜下层细胞外基质材料。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括：

步骤(5)，固定成型，包括：利用模具将一层或多层小肠粘膜下层细胞外基质材料平铺在模具上，用上下两个底板进行固定定型；

步骤(6)，干燥处理，包括：将固定于两个底板之间的小肠粘膜下层细胞外基质材料放入灭菌的通风烘箱中烘干。

3.根据权利要求2所述的方法，在步骤(6)之后包括步骤(7)，灭菌解析，包括采用环氧乙烷进行灭菌；然后在解析室中进行解析。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，在—20℃到—80℃下冷冻。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述灭活溶液与小肠粘膜下层组织的体积比为20:1～30:1；和/或，所述过氧化物的浓度为0.1％～10％(v/v)，乙醇的浓度为0.1～8％(v/v)。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，对灭活后的小肠粘膜下层组织进行清洗，包括：先采用清洗液在超声波清洗机中进行，超声波的功率在3500W以下，所述清洗液为PH值为7.2-7.4的PBS溶液，PBS溶液温度为20-37℃，PBS溶液与小肠粘膜下层组织的体积比为20:1～50:1；然后将用PBS清洗后的小肠粘膜下层组织进行去离子水超声清洗，去离子水温度为20-37℃，去离子水与小肠粘膜下层组织的体积比为20:1～50:1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，负电的范围为—0.5～—10V，加电时间为5～30分钟，电解液为PBS溶液；和/或用导电夹子将灭活后的小肠粘膜下层组织固定在负导电电极片上。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，将脱细胞后的小肠粘膜下层组织用PBS进行清洗。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，模具为带孔的网状板；和/或，步骤(6)中，通风烘箱的温度在10-40℃之间，烘干时间为2-8小时。

10.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(7)中，灭菌条件为：先在温度为10-40℃的保温箱中保温，然后通入浓度为200-900mg/L的环氧乙烷进行灭菌；和/或，在解析室中进行解析，温度控制在10-19℃之间。