[发明专利]重组表达大熊猫促黄体生成素的载体、表达系统及制备方法

说明书

本发明公开了重组表达大熊猫促黄体生成素的载体、表达系统及制备方法，涉及基因工程技术领域。其包括编码大熊猫LHβ亚基的第一基因和编码大熊猫LHα亚基的第二基因，第一基因的序列为SEQ ID NO.1所示，第二基因的序列为SEQ ID NO.3所示。通过构建重组表达大熊猫促黄体生成素的载体、表达系统可以实现大熊猫LHβ亚基、LHα亚基及其亚基复合物的稳定持续活性表达。表达产物可以用于诱导大熊猫发情及排卵，使用大熊猫源的促黄体生成素不会诱使机体产生不良反应，有利于大熊猫繁育质量的提升。此外，该重组制备方法简便易行，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及重组表达大熊猫促黄体生成素的载体、表达系统及制备方法。

背景技术

大熊猫是我国珍稀濒危动物，繁殖率低下制约着大熊猫种群数量与保育质量。研究表明，大熊猫繁殖率低下可能与促卵泡生成素 (Follicle stimulating hormone，FSH)、促黄体生成素(Luteinizing hormone，LH)等促性腺激素分泌不足有关。

为了提高大熊猫保育质量，多年来我国使用异种外源促性腺激素 (例如：马源促卵泡生成素(FSH)，马源促黄体生成素(LH))诱导大熊猫发情及排卵，然而，重复使用异种外源激素可能会诱使机体产生不良反应，进而影响其长期效果。目前，尚未有合适的方法解决上述问题。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供重组表达大熊猫促黄体生成素的载体、表达系统及制备方法以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

一种重组表达大熊猫促黄体生成素的载体，其包括编码大熊猫 LHβ亚基的第一基因和编码大熊猫LHα亚基的第二基因，第一基因的序列为SEQ ID NO.1所示，第二基因的序列为SEQ ID NO.3所示。

促黄体生成素(LH)是由α亚基和β亚基形成的异二聚体，其中，α亚基是由120个氨基酸残基构成，其序列参照SEQ ID NO.4所示，而β亚基由约141个氨基酸残基构成，其序列参照SEQ ID NO.5 所示。β亚基需与α亚基协作形成复合物。LH作为胞外信号分子，依赖与其特异性受体(促黄体生成素受体，LHR)发挥生物学活性。 LH相对分子量约为28kDa，LH主要功能是促进性细胞成熟，刺激性激素合成，促进和维持第二性征。

LH作用于卵巢，使卵泡膜产生雌激素，在卵泡发育接近成熟的时候与FSH一起作用于颗粒细胞，促进卵泡的成熟，LH作用于卵细胞周围组织使成熟卵细胞的排出得以顺利进行，参与调控非优势卵泡的闭锁和黄体化。

在睾丸中，LH主要诱导睾酮生成，促进精子成熟。

动物卵巢中含有大量处于不同发育期的卵泡，但并非所有的都能排出体外，约99％都发生闭锁退化，这正是由于FSH和LH共同调控的结果，纵观卵泡发育的整个过程，FSH主要在前期发生作用， LH发挥作用主要在后期，两种激素属于协作关系。在排卵过程中FSH和LH共同激发卵泡内纤溶酶原活化剂，产生大量蛋白溶解酶，使卵泡周围松散；LH突升期，卵泡中的前列腺素制造酶增加，大量前列腺素促使新血管聚集，血液集中，卵泡液增加，卵泡周围平滑肌收缩，将松散的卵子和卵丘细胞排出卵泡。LH不足会降低大熊猫对FSH的反应性，影响卵母细胞发育能力，而添加小剂量的LH，可以补救卵母细胞的发育潜能，使其发育成正常胚胎。

本发明通过构建重组表达大熊猫促黄体生成素的载体可以实现大熊猫LHβ亚基、LHα亚基及其亚基复合物的稳定持续活性表达。表达产物可以用于诱导大熊猫发情及排卵，使用大熊猫源的促黄体生成素不会诱使机体产生不良反应，有利于大熊猫繁育质量的提升。

上述载体还包括连接序列；