[发明专利]一种新型邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6或编码所述邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6的基因estj6或包括所述的基因estj6的表达载体或含有前述表达载体的重组微生物或重组邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6的制备方法在水解邻苯二甲酸酯类化合物中的应用；

所述邻苯二甲酸酯类化合物选自邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二戊酯、邻苯二甲酸二丙酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二己酯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙基己酯、邻苯二甲酸单甲酯，邻苯二甲酸单乙酯，邻苯二甲酸单丁酯，邻苯二甲酸单己酯和邻苯二甲酸单乙基己基酯；

所述邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6的氨基酸序列如SEQID No. 2所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述编码所述邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6的基因estj6的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述包括所述的基因estj6的表达载体是将权利要求2中所述基因estj6克隆到pET28a（+）中所得。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述含有前述表达载体的重组微生物以大肠杆菌BL21（DE3）为宿主细胞。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6的制备方法包括以下步骤：制备包括所述的基因estj6的表达载体，用所述表达载体转化宿主细胞，培养转化体，从培养物中分离得到所述重组邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述制备方法具体步骤为：将所述基因estj6进行PCR扩增，扩增产物经NcoI和HindIII双酶切，与pET28a（+）载体连接，得到pET28a（+）-etsj6表达载体，将该表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3），培养转化体，经IPTG诱导，从培养物中分离纯化，获得重组邻苯二甲酸酯水解酶EstJ6。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，用于特异性扩增基因estj6的引物包括以下两条引物序列：

上游引物如SEQ ID No. 3所示；

下游引物如SEQ ID No . 4所示。