[发明专利]基于Veillonella菌的小鼠用胶囊的制备方法

权利要求书

1.一种基于Veillonella菌的小鼠用胶囊的制备方法，其特征在于，所述基于Veillonella菌的小鼠用胶囊的制备方法包括以下步骤：

步骤一，Veillonella菌株的采集、筛选及纯化；

步骤二，胶囊的制作；

步骤三，将冷冻的Veillonella菌包裹于胶囊中，即得基于Veillonella菌的小鼠用胶囊。

2.如权利要求1所述的基于Veillonella菌的小鼠用胶囊的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述Veillonella菌株的采集方法具体包括：

(1)提供一个15ml的离心管，插着1ml的吸管针尖；

(2)将吸管的针尖浸入粪便的卫生纸中，然后放回到管子里，用收集的日期和时间给管子贴上标签；

(3)样品被保存在4℃处进行短期储存，直到样品收集完毕；放置在干冰上，然后转移到-80℃冰箱进行长期储存。

3.如权利要求1所述的基于Veillonella菌的小鼠用胶囊的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述Veillonella菌株筛选方法具体包括：

(1)粪便样品在冰上解冻，再悬浮在2-5ml的PBS中，其中250ml用于使用MoBioPowerSoil高通量DNA提取试剂盒进行DNA提取；

(2)对于16S rDNA文库的构建，用1～5-1的纯化DNA，用Q5热启动聚合酶(NEB)对V4可变区进行PCR扩增，筛选出Veillonella菌株；

(3)将Veillonella菌株在250ml BHIL和MRS肉汤中培养；

(4)监测600nm波长下的光密度，细胞经5000g冷冻离心10min制粒；

(5)用PBS洗涤球粒，用2ml剩余PBS重悬；

(6)将100ml的等份样品在-80℃下冷冻，并通过在BHIL琼脂平板上的连续稀释测量每毫升的菌落形成单位数量。

4.如权利要求1所述的基于Veillonella菌的小鼠用胶囊的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述Veillonella菌株的纯化方法具体包括：

(1)用3倍柱体积的无菌水冲洗Ni²⁺亲和柱中的树脂，再用3倍柱体积的结合缓冲液平衡树脂，放置待用；

(2)取冻存的100ml细菌培养液的细胞沉淀置于4ml结合缓冲液中；

(3)加入溶菌酶至终浓度为1mg/ml，冰上放置30min；

(4)混合物于4℃摇床上孵育10min；

(5)加入TritonX-100、DNase和RNase，终浓度分别为1％、5ug/ml、5ug/ml，再于4℃摇床上孵育10min；

(6)在4℃、5000rpm的条件下离心30min，去除不溶性细胞碎片；上清转移到一只新管中，得到纯化的Veillonella菌。

5.如权利要求1所述的基于Veillonella菌的小鼠用胶囊的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述胶囊的制作方法具体包括：

(1)先活化Veillonella菌，按照体积比为4％的接种量把种子液接种到培养基中，放入30℃恒温培养箱中静置培养6d；

(2)取出生成的细菌纤维素膜，放入NaOH溶液中浸泡处理，再用流动的蒸馏水冲洗，直至冲洗液的pH接近中性；

(3)将步骤(2)得到的细菌纤维素膜放入打浆机中，12000rpm打磨10分钟；

(4)将步骤(3)所得糊状细菌纤维素进行灭菌处理；

(5)将步骤(4)灭菌后的糊状细菌纤维素浇灌到胶囊外壳模具中，干燥、冷却、风干成型；

(6)将药品灌入一个胶囊外壳内，将另一个胶囊外壳套在已灌入药品的胶囊外壳口处，用以封闭胶囊。

6.一种由权利要求1～5任意一项所述基于Veillonella菌的小鼠用胶囊的制备方法制备的胶囊。

7.一种如权利要求6所述胶囊在提升运动能力中的应用。

8.一种如权利要求6所述胶囊在调控肠道菌群中的应用。